پېستىتسىدلار دۇنيا مىقياسىدا ئاشلىق يېتىشمەسلىكىنى ھەل قىلىش ۋە ۋېكتورلار ئارقىلىق يۇقىدىغان ئىنسانلارنىڭ كېسەللىكلىرىگە قارشى تۇرۇشتا مۇھىم رول ئوينايدۇ. قانداقلا بولمىسۇن، پېستىتسىدقا قارشى تۇرۇش مەسىلىسىنىڭ كۈچىيىشى، ئىشلىتىلمىگەن نىشانلارغا قارىتىلغان يېڭى بىرىكمىلەرنى بايقاشنى جىددىي تەلەپ قىلىدۇ. ھاشاراتلارنىڭ ۋاقىتلىق قوبۇللىغۇچ پوتېنسىيالى (TRPV) قاناللىرى - نانجوڭ (Nan) ۋە ئاكتىپ ئەمەس (Iav) - ھەر خىل قاناللارنى (Nan-Iav) ھاسىل قىلىپ، ھاشاراتلاردا گېئوتروپىزم، ئاڭلاش ۋە پروپرىئوسېپسىيەنى ۋاسىتىچىلىك قىلىدىغان مېخانىزم سېزىم ئەزالىرىغا جايلاشقان بولۇشى مۇمكىن. ئافىدوپىررولىدون (AP) قاتارلىق بەزى پېستىتسىدلار نامەلۇم مېخانىزملار ئارقىلىق Nan-Iav نى نىشان قىلىدۇ. AP تېشىش-سۈمۈرۈش ھاشاراتلىرىغا (hemipterans) قارشى ئۈنۈملۈك بولۇپ، تالالارنىڭ ئىقتىدارىنى بۇزۇش ئارقىلىق يېمەكلىكنىڭ ئالدىنى ئالىدۇ. AP پەقەت Nan بىلەن باغلىنالايدۇ، ئەمما پەقەت Nan-Iavلا ئېندوگېن نىكوتىنامىدىد (NAM) قاتارلىق ئاگونىستلار بىلەن ئۆز-ئارا تەسىر كۆرسىتىپ، قانال پائالىيىتىنى نامايان قىلالايدۇ. Nan-Iav نىڭ ھاشاراتقا قارشى تۇرۇش نىشانى بولۇش ئىقتىدارىغا قارىماي، ئۇنىڭ قانال يىغىلىشى، تەڭشەش ئورنى ۋە Ca2+ غا تايىنىدىغان تەڭشىلىشى توغرىسىدا ئاز مەلۇمات بار، بۇ بولسا ھاشاراتلارنىڭ تېخىمۇ تەرەققىي قىلىشىغا توسقۇنلۇق قىلىدۇ. بۇ تەتقىقاتتا، كرىئو-ئېلېكترون مىكروسكوپى ئارقىلىق ھېمىپتېرا ھاشاراتلىرىدىكى Nan-Iav نىڭ قۇرۇلمىسى كالمودۇلىن-لىگاندسىز ھالەتتە، شۇنداقلا ئانكىرىن تەكرار سىتوپلازما رايونى (ARD) چېگرىسىدا AP ۋە NAM بىلەن بېكىتىلدى. ھەيران قالارلىقى شۇكى، بىز Nan ئاقسىلىنىڭ ئۆزى AP ئارقىلىق ئېلىپ بېرىلىدىغان ARD ئۆز-ئارا تەسىر كۆرسىتىش ئارقىلىق مۇقىملىشىدىغان پېنتامېر ھاسىل قىلالايدىغانلىقىنى بايقىدۇق. بۇ تەتقىقات ھاشارات ئۆلتۈرۈش دورىلىرى بىلەن ئاگونىستلار ۋە Nan-Iav ئوتتۇرىسىدىكى مولېكۇلا ئۆز-ئارا تەسىرنى ئاشكارىلاپ، ARD نىڭ قانال ئىقتىدارى ۋە يىغىلىشىدىكى مۇھىملىقىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ ھەمدە Ca2+ نىڭ تەڭشىلىش مېخانىزمىنى تەكشۈرىدۇ.
دۇنيا مىقياسىدا كۈنسېرى ئېغىرلىشىۋاتقان كىلىمات ئۆزگىرىشى ئارقا كۆرۈنۈشىدە، دۇنيا مىقياسىدا ئاشلىق بىخەتەرلىكىنىڭ ناچارلىشىشى 21-ئەسىردىكى ئاساسلىق خىرىسلارنىڭ بىرى بولۇپ، جەمئىيەتكە ئېغىر ئاقىۋەتلەرنى ئېلىپ كېلىدۇ.1،2دۇنيا سەھىيە تەشكىلاتىنىڭ «دۇنيادىكى ئاشلىق بىخەتەرلىكى ۋە ئوزۇقلۇق ئەھۋالى 2023» دوكلاتىدا، دۇنيادا تەخمىنەن 2 مىليارد 330 مىليون ئادەم ئوتتۇراھال ۋە ئېغىر دەرىجىدىكى ئاشلىق بىخەتەرلىكى مەسىلىسىدىن ئازاب چېكىۋاتقانلىقى، بۇ ئۇزۇندىن بۇيان داۋاملىشىپ كېلىۋاتقان مەسىلە ئىكەنلىكى مۆلچەرلەنگەن.3،4ئەپسۇسلىنارلىقى شۇكى، ھەر يىلى زىرائەت ھوسۇلىنىڭ تەخمىنەن %20 تىن %30 كىچە ياكى ئۇنىڭدىنمۇ كۆپ قىسمى زىيانداش ھاشاراتلار ۋە كېسەللىك قوزغاتقۇچىلار تەرىپىدىن يوقىتىلىدۇ، ھەمدە يەر شارىنىڭ ئىسسىپ كېتىشى زىيانداش ھاشاراتلارغا قارشى تۇرۇش كۈچى ۋە زىرائەتلەرنىڭ ئاجىزلىقىنى تېخىمۇ كۈچەيتىۋېتىشى مۇمكىن.4،5،6،7،8پېستىتسىدلارنى تەرەققىي قىلدۇرۇش پەقەت زىرائەتلەرنى زىيانداش ھاشاراتلاردىن قوغداش ۋە ۋېكتور ئارقىلىق تارقىلىدىغان كېسەللىكلەرنىڭ تارقىلىشىنى ئازايتىش ئۈچۈنلا ئەمەس، بەلكى پېستىتسىدلارغا بارغانسېرى چىداملىق بولۇۋاتقان دېنگې قىزىتمىسى، بەزگەك ۋە چاگاس كېسىلى قاتارلىق ۋېكتور ئارقىلىق تارقىلىدىغان ئىنسانلار كېسەللىكلىرىگە قارشى تۇرۇش ئۈچۈنمۇ ئىنتايىن مۇھىم.5،9،10،11
نېرۋا زەھەرلىك ھاشاراتلارغا قارشى دورىلارنىڭ ئاساسلىق نىشانلىرى ئىچىدە، ھېتېروتېترامېرلىق TRPV قانىلى نانچۇڭ (Nan)-ئىجابىي ئەمەس (Iav) پەقەت ئۆتكەن ئون يىلدا بايقالغان بىر خىل ھاشاراتلارغا قارشى دورىلارنىڭ نىشانى بولۇپ، بۇنىڭ ئىچىدە ئىمىداكلوپرىد ۋە پىراكلوستروبىن قاتارلىق بازاردا سېتىلىۋاتقان ھاشاراتلارغا قارشى دورىلار بار.12،13،14يېرىم سىنتېزلىق ھاشاراتقا قارشى ئافىدوپىررولىفېن (AP) يېقىندا تەرەققىي قىلدۇرۇلغان ۋە سودا خاراكتېرلىك مەھسۇلات بولۇپ، ئۇنىڭ ئاساسلىق تەركىبىي قىسمى ئاكتىپ ھاشاراتقا قارشى ماددا Inscalis® بولۇپ، ئۇ AP نى نانومولار ئاستىدىكى پائالىيەت سەۋىيىسىدە باغلايدۇ.15AP چاڭلاتقۇچىلار، پايدىلىق ھاشاراتلار ۋە باشقا نىشان بولمىغان ئورگانىزملارغا نىسبەتەن تۆۋەن ئۆتكۈر زەھەرلىكلىك كۆرسىتىدۇ، ھەمدە بەلگىدىكى كۆرسەتمىلەرگە ئاساسەن ئىشلىتىلگەندە، باشقا ھاشاراتلارغا قارشى تۇرۇش بېسىمىنى تۆۋەنلىتىدۇ.16،17،18Nan ۋە Iav ھاشارات تۈرلىرى ئارىسىدا كەڭ تارقالغان بولۇپ، پەقەت ئانتېننا ۋە ئەزالارنىڭ خوردال سوزۇلۇش رېتسېپتورى نېرۋا ھۈجەيرىلىرىدە بىرلىكتە ئىپادىلىنىدۇ، ھەمدە ئاڭلاش، تارتىش كۈچىنى سېزىش ۋە پروپرىئوسېپسىيە ئۈچۈن ئىنتايىن مۇھىم.13،16،19،20،21،22AP، ئىمىداكلوپرىد ۋە پىراكلوستروبىن ئۆزگىچە مېخانىزم ئارقىلىق Nan-Iav بىرىكمىسىنى قوزغىتىپ، ئاخىرىدا پروپرىئوسېپسىيە سىگنالىنىڭ يەتكۈزۈلۈشىنى چەكلەيدۇ.13،16،23شىرە ۋە ئاق پاشىغا ئوخشاش تېشىش ئارقىلىق سۈمۈرىدىغان ھاشاراتلاردا (يېرىمپتېرانلار)، پىپرىئوسېپسىيەنىڭ يوقىلىشى ئۇلارنىڭ ئوزۇقلىنىش ئىقتىدارىغا تەسىر كۆرسىتىپ، ئاخىرىدا ئۆلۈمگە ئېلىپ بارىدۇ.13،24قىزىقارلىقى شۇكى، AP نىڭ Nan-Iav بىرىكمىسىگە بولغان يېقىنلىقى يۇقىرى، Nan غا بولغان يېقىنلىقى تۆۋەن. AP نىڭ Nan-Iav غا باغلىنىشى ئېلېكتر ئېقىمىنى قوزغىتىدۇ، ئەمما Nan غا باغلىنىش قانال پائالىيىتىنى قوزغىتمايدۇ. Iav نىڭ ئۆزى AP غا قەتئىي باغلانمايدۇ.16بۇ Nan ۋە Iav نىڭ ئوخشىمايدىغان Nan-Iav قانال كومپلېكىسلىرىنى ھاسىل قىلىش ئۈچۈن بىرىكىدىغانلىقىنى (مەسىلەن، ئوخشىمايدىغان ستېخىئومېتىرىك نىسبەتلەر ياكى ئوخشاش ستېخىئومېتىرىك نىسبەت ئىچىدە ئوخشىمايدىغان تەرتىپلەر بىلەن) ياكى AP نىڭ كۆپ ئورۇنلارغا بىرىكىدىغانلىقىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ. ئۇنىڭدىن باشقا، تەبىئىي ئاگونىست نىكوتىنامىت (NAM) مىكرومولارلىق يېقىنلىق بىلەن Drosophila Nan-Iav غا بىرىكىدۇ، بۇ سىناق جەريانىدا بىتلارغا (AP) ئوخشاش تەسىر كۆرسىتىدۇ.16،25ۋە قۇرتلارنىڭ كۆپىيىشى ۋە يەملىنىشىنى توسۇپ، ئاخىرىدا ئۇلارنىڭ ئۆلۈمىگە سەۋەب بولىدۇ25،26بۇ سانلىق مەلۇماتلار نۇرغۇن سوئاللارنى كەلتۈرۈپ چىقىرىدۇ. مەسىلەن، Nan-Iav ھېتېرودىمېرىنىڭ قانداق شەكىللەنگەنلىكى، كىچىك مولېكۇلالارنى تەڭشەش ئۈچۈن قايسى باغلىنىش ئورۇنلىرى ئىشلىتىلگەنلىكى ۋە بۇ كىچىك مولېكۇلالارنىڭ قانداق قىلىپ پروپرىئوسېپسىيەنى باستۇرۇش ئارقىلىق قانال ئىقتىدارىنى تەڭشەيدىغانلىقى ئېنىق ئەمەس. ئۇنىڭدىن باشقا، Nan نىڭ ئۆزىنىڭ نېمە ئۈچۈن ئاكتىپ ئەمەسلىكى ۋە AP غا بولغان يېقىنلىقى تۆۋەن، Nan-Iav ھېتېرودىمېرىنىڭ نېمە ئۈچۈن ئاكتىپ ئىكەنلىكى ۋە AP غا يۇقىرى يېقىنلىق بىلەن باغلىنىدىغانلىقىنىڭ سەۋەبلىرى ئېنىق ئەمەس. ئاخىرىدا، Nan-Iav ئىقتىدارىنىڭ Ca2+ غا تايىنىدىغان تەڭشىلىشى ۋە ئۇنىڭ نېرۋا سىگنال جەريانلىرىغا قانداق بىرلەشتۈرۈلۈشى توغرىسىدا ئاز نەرسە مەلۇم.. 13،21
بۇ تەتقىقاتتا، توڭلىتىلغان ئېلېكترون مىكروسكوپىيە، ئېلېكتروفىزىئولوگىيە ۋە رادىئولىگاند باغلاش تېخنىكىسىنى بىرلەشتۈرۈپ، بىز Nan-Iav نىڭ يىغىلىشى ۋە ئۇنىڭ كىچىك مولېكۇلا تەڭشىگۈچلىرىگە باغلىنىش مېخانىزمىنى چۈشەندۈردۇق. بۇنىڭدىن باشقا، بىز Iav ۋە AP مۇقىملاشتۇرۇلغان Nan پېنتامېرلىرىغا قويۇق باغلىنىشلىق كالمودۇلىن (CaM) نى بايقىدۇق. بۇ نەتىجىلەر قاناللاردىكى كالتسىي ئىئونلىرىنىڭ تەڭشىلىشى، قانال يىغىلىشى ۋە لىگاند باغلىنىش يېقىنلىقىنى بەلگىلەيدىغان ئامىللار توغرىسىدا مۇھىم چۈشەنچىلەرنى بېرىدۇ. ئەڭ مۇھىمى، بىز ARD نىڭ بۇ جەريانلاردا مەركىزىي رول ئوينايدىغانلىقىنى جەزملەشتۈردۇق. مۇناسىۋەتلىك دېھقانچىلىق پېستىتسىدلىرىغا باغلىنىشلىق تولۇق ھاشارات قاناللىرىنى تەتقىق قىلىشىمىز.27، 28، 29پېستىتسىد سانائىتىنىڭ تەرەققىياتى ئۈچۈن ئىستىقبال ئاچىدۇ، پېستىتسىدلارنىڭ ئۈنۈمى ۋە خاسلىقىنى ئاشۇرىدۇ، شۇنداقلا TRPV نىشانلىق بىرىكمىلىرىنى باشقا تۈرلەرگە قوللىنىش ئارقىلىق دۇنياۋى ئاشلىق بىخەتەرلىكى ۋە ۋېكتور ئارقىلىق تارقىلىدىغان كېسەللىكلەرنىڭ تارقىلىشى مەسىلىسىنى ھەل قىلىشقا شارائىت ھازىرلايدۇ.
بىز يەنە Nan-Iav نىڭ Ca2+ تەرىپىدىن تەڭشىلىنىدىغانلىقىنى، تەڭشەش مېخانىزمىنىڭ بولسا CaM تەرىپىدىن باشقۇرۇلىدىغانلىقىنى بايقىدۇق. مۇھىمى، CaM تەرىپىدىن Nav نىڭ Ca2+ غا تايىنىدىغان تەڭشىلىشى باشقا ئىئون قاناللىرىنىڭ (مەسىلەن، توك بېسىمىغا باغلىق Na+ قاناللىرى ۋە TRPV5/6 قاناللىرى) تەڭشەش مېخانىزمىدىن زور دەرىجىدە پەرقلىنىدۇ.52،53،54،55،56،57Nav1.2 قانىلىدا، CaM نىڭ C-تېرمىنال رايونى C-تېرمىنال رايونى (CTD) بىلەن سىپرال شەكىلدە باغلىنىدۇ، ھەمدە Ca2+ ئۆزىنىڭ N-تېرمىنال رايونىنىڭ CTD نىڭ يىراق قىسمىغا باغلىنىشىنى قوزغىتىدۇ.56TRPV5/6 قانىلىدا، CaM نىڭ C-تېرمىنال رايونى CTH بىلەن باغلىنىدۇ، Ca2+ بولسا N-تېرمىنال رايونىنىڭ يۇقىرىغا قاراپ كېڭىيىشىنى كەلتۈرۈپ چىقىرىپ، كاتىئون ئۆتكۈزۈشچانلىقىنى توسىدۇ.53،54بىز Nan-Iav-CaM نىڭ Ca2+ تەڭشەلگەن فۇنكسىيەسى ئۈچۈن بىر مودېل تەۋسىيە قىلىمىز (4h-رەسىم). بۇ مودېلدا، CaM نىڭ N-تېرمىنال رايونى Iav نىڭ C-تېرمىنال رايونى (CTH) بىلەن بىردەك باغلىنىدۇ. تىنچ ھالەتتە (تۆۋەن [Ca2+] قويۇقلۇقى)، CaM نىڭ C-تېرمىنال رايونى Nan بىلەن ئۆز-ئارا تەسىر كۆرسىتىپ، ARD قۇرۇلمىسىنى مۇقىملاشتۇرۇپ، قانالنىڭ ئېچىلىشىنى ئىلگىرى سۈرىدۇ. بىر ئاگونىست/ھاشارات ئۆلتۈرۈش دورىسىنىڭ قانالغا باغلىنىشى تۆشۈكلەرنىڭ ئېچىلىشىنى كەلتۈرۈپ چىقىرىپ، Ca2+ نىڭ ئېقىپ كىرىشىگە سەۋەب بولىدۇ. ئاندىن Ca2+ CaM غا باغلىنىپ، C-تېرمىنال رايونىنىڭ Nan نىڭ ARD دىن ئايرىلىشىنى كەلتۈرۈپ چىقىرىدۇ. CaM نىڭ باغلىنىشىنى توسۇش ئاساسەن Ca2+ نىڭ توسۇش رولىنى يوقىتىدىغان بولغاچقا، بۇ ئايرىلىش ARD نىڭ ھەرىكەتچانلىقىنى تەڭشەيدۇ، شۇنىڭ بىلەن Ca2+ غا تايىنىدىغان توسۇش ياكى سەزگۈرلۈكنى تۆۋەنلىتىدۇ. كالتسىي ئىئونى ئېلۇتسىيە قىلىنغاندىن كېيىن قانال ئېقىمىنىڭ تېز ئەسلىگە كېلىشى (4g-رەسىم) بۇ مېخانىزمنىڭ Ca2+ ۋاسىتىلىك نېرۋا سىگناللىرىغا تېز ئىنكاس قايتۇرۇشنى قولايلاشتۇرىدىغانلىقىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ. بۇنىڭدىن باشقا، Iav نىڭ C-تېرمىنال رايونى يەنىلا ياخشى چۈشىنىلمىگەن بولۇپ، قانالنى نىشانلاش ۋە نۆۋەتتىكى تەڭشەشتە باشقا روللارنى ئوينايدىغانلىقى خەۋەر قىلىنغان.21
ئاخىرىدا، بىزنىڭ تەتقىقاتىمىز دېھقانچىلىقتا مۇھىم ئەھمىيەتكە ئىگە بولغان ھاشارات-ھاشارات ئۆلتۈرۈش TRP قانىلىنىڭ يۇقىرى ئېنىقلىقتىكى قۇرۇلمىسىنى نامايان قىلىدۇ - بۇ بايقاش بىزگە ئىلگىرى نامەلۇم ئىدى. دىققەت قىلىشقا ئەرزىيدىغىنى شۇكى، بىز ھاشارات قانىلىنىڭ قۇرۇلمىسى ۋە ئىقتىدارىنى ھاشارات ھۈجەيرىلىرىدىكى ئەمەس، بەلكى ئىنسان ھۈجەيرىلىرىدىكى (HEK293S GnTi–) خاراكتېرلەندۈردۇق. ھاشاراتلارغا قارشى تۇرۇش كۈچىيىۋاتقانلىقى ۋە يېمەكلىك بىخەتەرلىكى ۋە كېسەللىك قوزغاتقۇچى مىكروبلارغا بولغان داۋاملىق بېسىمغا دۇچ كېلىۋاتقان ئەھۋالدا، بىزنىڭ خىزمىتىمىز ئىنسانلارنىڭ سالامەتلىكى ۋە دۇنياۋى يېمەكلىك بىخەتەرلىكى ئۈچۈن يېڭى ھاشارات ئۆلتۈرۈش دورىلىرىنى تەرەققىي قىلدۇرۇشقا ياردەم بېرىدىغان مۇھىم ئۇچۇرلارنى تەمىنلەيدۇ. تەتقىقاتلار AP قاتارلىق ھاشارات ئۆلتۈرۈش دورىلىرىنىڭ بەلگىدىكى كۆرسەتمىلەرگە ئاساسەن ئىشلىتىلگەندە بەزى ھاشاراتلارغا قارشى ئۈنۈملۈك ئىكەنلىكىنى ۋە پايدىلىق چاڭلاتقۇچىلارغا نىسبەتەن تۆۋەن ئۆتكۈر زەھەرلىكلىكىنى كۆرسىتىپ، ئۇلارنىڭ مۇھىت بىخەتەرلىكىنى نامايان قىلىدىغانلىقىنى كۆرسەتتى.13،16بۇنىڭدىن باشقا، بەزى AP ھاسىلاتلىرىنى پاشىلار ئۈستىدە سىناق قىلىش ئۇلارنىڭ ئاخىرىدا ئۇچۇش ئىقتىدارىنى يوقىتىدىغانلىقىنى كۆرسەتتى. بۇ تەڭشەش بىرىكمىلىرىنىڭ Nan-Iav بىلەن قانداق باغلىنىشىنى چۈشىنىش مەۋجۇت بىرىكمىلەرنى ئۆزگەرتىشنى ياكى يېڭى بىرىكمىلەرنى تەرەققىي قىلدۇرۇشنى ئاسانلاشتۇرىدۇ، بۇنىڭ بىلەن تېخىمۇ ئۈنۈملۈك ۋە ئۈنۈملۈك بولىدۇ.ئېنىقزىيانداش ھاشاراتلارنىڭ ئالدىنى ئېلىش. بىزنىڭ تەتقىقاتىمىز Nan-Iav ARD چېگرىسىنىڭ پەقەت ئىچكى بىرىكمىلەر، پېستىتسىدلار ۋە Ca2+-CaM نىڭ پائالىيىتىنى تەڭشەش ئۈچۈنلا ئەمەس، بەلكى قانال يىغىلىشى ئۈچۈنمۇ مۇھىم ئىكەنلىكىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ. بىز كىچىك مولېكۇلا بىلەن ھېتېرودىمېر يىغىلىشىنى بۇزۇش ئىئون قانىلىنى چەكلىگۈچىلەرنى تەرەققىي قىلدۇرۇشتا ئۆزگىچە ۋە ئۈمىدۋار ئۇسۇل بولۇشى مۇمكىن دەپ قارايمىز.
سەككىز ئورتولوگ گېن ئىچىدىن، قوڭۇر قوڭغۇز (Halyomorpha halys) نىڭ تولۇق ئۇزۇنلۇقتىكى گېنلىرى Nanchung ۋە Inactive تاللىنىپ، يۇيۇش سۇيۇقلۇقلىرىدا ئەلا تۇراقلىقلىق كۆرسەتتى. سىنتېزلانغان گېنلار ئىنسانلارنىڭ ئىپادىلىنىشى ئۈچۈن كودونغا ئەلالاشتۇرۇلۇپ، XhoI ۋە EcoRI چەكلەش ئورۇنلىرى ئارقىلىق pBacMam pCMV-DEST ۋېكتورىغا (Life Technologies) كىلونلاندى. بۇ كىلونلارنىڭ C تېرمىنالى GFP-FLAG-10xHis ۋە mCherry-FLAG-10xHis بەلگىلىرى بىلەن بىر رامكىدا بولۇشىغا كاپالەتلىك قىلدى، بۇ بەلگىلەر HRC-3C پروتېئازا (PPX) تەرىپىدىن پارچىلىنىپ، مۇستەقىل ھالدا گېنلارنىڭ ئۆزگىرىشىگە يول قويدى.ئىپادىنانچۇڭ ۋە ئىناكتىپنى pBacMam ۋېكتورىغا كىلونلاش ئۈچۈن ئىشلىتىلگەن باشلانغۇچلار تۆۋەندىكىچە:
ئايرىم زەررىچىلەرنىڭ مىكروسكوپ سۈرەتلىرى K3 كامېراسى ۋە Gatan BioQuantum ئېنېرگىيە سۈزگۈچ ئورنىتىلغان Titan Krios G2 ئېلېكترون مىكروسكوپى (FEI) دا ئېلىندى. مىكروسكوپ 300 keV دا ئىشلەنگەن، ئېنېرگىيە تەڭشىكى 20 eV، ئۈلگە پىكسېل چوڭلۇقى 1.08 Å/پىكسېل (ناملىق چوڭايتىش 81,000x) ۋە فوكۇسنى يوقىتىش گرادىيېنتى -0.8 دىن -2.2 μm غىچە بولغان ئارىلىقتا ئىدى. سىن خاتىرىلەش ناملىق دوزا سۈرئىتى 25 e–px−1 s−1، ئاشكارىلاش ۋاقتى 2.4 سېكۇنت ۋە ئومۇمىي دوزا تەخمىنەن 60 e–Å−2 بولغان Latitude S مىكروسكوپى (Gatan) ئارقىلىق سېكۇنتىغا 40 كادىر سۈرئەتتە ئېلىپ بېرىلدى.
نۇر كەلتۈرۈپ چىقارغان ھەرىكەت تۈزىتىش ۋە دورا ئېغىرلىقى RELION 4.061 دىكى MotionCor2 ئارقىلىق پىلاستىنكىدا ئېلىپ بېرىلدى. كونتراست ئۆتكۈزۈش فۇنكسىيەسى (CTF) پارامېتىرىنى باھالاش cryoSPARC دا ياماق ئاساسلىق CTF باھالاش ئۇسۇلى ئارقىلىق ئېلىپ بېرىلدى62. CTF ماسلاشتۇرۇش ئېنىقلىقى ≥4 Å بولغان فوتومىكروگرافلار كېيىنكى ئانالىزدىن چىقىرىۋېتىلدى. ئادەتتە، cryoSPARC دا نۇقتا تاللاش ئۈچۈن 500–1000 فوتومىكروگرافنىڭ بىر قىسمى ئىشلىتىلدى، ئاندىن قېلىپ ئاساسلىق زەررىچە تاللاش ئۈچۈن ئېنىق پايدىلىنىش رەسىمىگە ئېرىشىش ئۈچۈن سۈزگۈچتىن كېيىن بىر قانچە قېتىم 2D تۈرگە ئايرىش ئېلىپ بېرىلدى. ئاندىن زەررىچىلەر 64 پىكسېللىق چەكلىمە قۇتىلىرى ۋە 4 قېتىم قاتلاش ئارقىلىق ئېلىندى. كېرەكسىز زەررىچە تۈرلىرىنى چىقىرىۋېتىش ئۈچۈن بىر قانچە قېتىم 2D تۈرگە ئايرىش ئېلىپ بېرىلدى. دەسلەپكى 3D مودېل ab initio قايتا قۇرۇش ئارقىلىق قايتا قۇرۇلدى ۋە cryoSPARC دا تەكشى بولمىغان تۈزىتىش ئارقىلىق مۇكەممەللەشتۈرۈلدى. 3D تۈرگە ئايرىش cryoSPARC ياكى RELION دا ARD نىڭ كۆپ خىللىقىغا ئاساسەن ئېلىپ بېرىلدى. پەردە رايونلىرىنىڭ مۇھىم كۆپ خىللىقى كۆزىتىلمىدى. زەررىچىلەر C1 ۋە C2 ئۇسۇللىرى ئارقىلىق پىششىقلاپ ئىشلەنگەن؛ C2 ئېنىقلىقى يۇقىرى زەررىچىلەر C2 گە نىسبەتەن سىممېترىك دەپ قارالغان ۋە بايېس پىششىقلاپ ئىشلەش ئۈچۈن RELION غا ئىمپورت قىلىنغان. ئاندىن زەررىچىلەر ئاخىرقى تەكشى ئەمەس ۋە يەرلىك پىششىقلاپ ئىشلەش ئۈچۈن cryoSPARC غا قايتۇرۇلغان. ئاخىرقى ئېنىقلىق ۋە زەررىچە سانى 1-جەدۋەلدە كۆرسىتىلگەن.
Nan+AP پېنتامېرلىرىنى بىر تەرەپ قىلغاندا، بىز پەردە رايونلىرىنىڭ (بولۇپمۇ تۆشۈك رايونى) ئېنىقلىقىنى ياخشىلاش ئۈچۈن سىگنالنى چىقىرىۋېتىش ۋە TMD ماسكا ئىشلىتىش قاتارلىق ھەر خىل ئۇسۇللارنى تەتقىق قىلدۇق. قانداقلا بولمىسۇن، بۇ سىناقلار تۆشۈك رايونىدىكى ئېھتىماللىقى يۇقىرى بولغان قالايمىقانچىلىق ۋە TMD نىڭ ئومۇمىي كۆپ خىللىقى سەۋەبىدىن مۇۋەپپەقىيەت قازىنالمىدى. ئاخىرقى ئېنىقلىق ئاساسلىقى ARD رايونىنى نىشان قىلىپ، cryoSPARC دا تەكشى بولمىغان بىر تەرەپ قىلىش ئۇسۇلى ئارقىلىق ئاپتوماتىك ھاسىل قىلىنغان ماسكا ئارقىلىق ھېسابلىنىدۇ. بۇ ئۇسۇل پەردە رايونلىرىغا (بولۇپمۇ VSLD رايونىغا) قارىغاندا كۆرۈنەرلىك يۇقىرى ئېنىقلىققا ئېرىشتى.
نانچۇڭ ۋە ئاكتىپ ئەمەس قۇرتلارنىڭ apo شەكىللىرىنىڭ دەسلەپكى de novo مودېللىرى ئالدى بىلەن Coot63 ئارقىلىق ھاسىل قىلىندى، Nan ۋە Iav قۇرتلىرىنىڭ مودېللىرى AlphaFold264 ئارقىلىق ھاسىل قىلىندى، بۇنىڭ بىلەن ئىشەنچلىكلىكى تۆۋەن رايونلارنى ئېنىقلىدى. كالمودۇلىن مودېلى ئايرىم-ئايرىم ھالدا PDB 4JPZ56 ۋە 1CFD65 دىكى Ca2+ باغلىنىشلىق ۋە Ca2+سىز مودېللارنىڭ قاتتىق جىسىم ماسلىشىشىغا ئاساسلاندى. مودېللار توغرا ستېرېئوخىمىيە ۋە ياخشى گېئومېتىرىيەنى كاپالەتلەندۈرۈش ئۈچۈن شار شەكىللىك تۈزىتىش ئارقىلىق مۇكەممەللەشتۈرۈلدى. ئاندىن فوسفاتىدىلخولىن، فوسفاتىدىلېتانولام ۋە فوسفاتىدىلسېرىن ئېنىق بەلگىلەنگەن لىپىد زىچلىقى سۈپىتىدە مودېللاشتۇرۇلدى، ھەمدە NAM ۋە AP بىرىكمىلىرى زىچ تۇتاشتۇرۇش نۇقتىلىرىدىكى ماس كېلىدىغان زىچلىققا قويۇلدى. چەكلىمە ھۆججەتلىرى PHENIX66 دىكى eLBOW ئارقىلىق ئىزوفورمىلارنىڭ SMILES تىزمىسىدىن ھاسىل قىلىندى. ئاخىرىدا، مودېللار PHENIX دىكى ھەقىقىي بوشلۇقتا يەرلىك تور ئىزدەش ۋە ئىككىنچى دەرىجىلىك قۇرۇلما چەكلىمىسى بىلەن دۇنياۋى ئەڭ تۆۋەن چەككە چۈشۈرۈش ئارقىلىق مۇكەممەللەشتۈرۈلدى. مودېلنى ياخشىلاش ۋە قۇرۇلما ئانالىزى ئۈچۈن MolProbity سېرۋېرى ئىشلىتىلدى، ھەمدە PyMOL ۋە UCSF Chimera X ئارقىلىق رەسىملەر سىزىلدى. 67،68،69 HOLE سېرۋېرى ئارقىلىق دىئافراگما ئانالىزى،70 Consurf سېرۋېرى ئارقىلىق تەرتىپنى ساقلاش خەرىتىسىنى سىزىش ئېلىپ بېرىلدى.71
ستاتىستىكىلىق ئانالىز Igor Pro 6.2، Excel Office 365 ۋە GraphPad Prism 7.0 ئارقىلىق ئېلىپ بېرىلدى. بارلىق مىقدار سانلىق مەلۇماتلىرى ئوتتۇرىچە قىممەت ± ئۆلچەملىك خاتالىق (SEM) شەكلىدە كۆرسىتىلدى. ئىككى گۇرۇپپىنى سېلىشتۇرۇش ئۈچۈن ستۇدېنتنىڭ t-سىناق ئۇسۇلى (ئىككى تەرەپلىك، جۈپسىز) ئىشلىتىلدى. كۆپ گۇرۇپپىلارنى سېلىشتۇرۇش ئۈچۈن بىر تەرەپلىك دىئاپرېسسىيە ئانالىزى (ANOVA) ۋە ئۇنىڭدىن كېيىن Dunnett نىڭ post hoc سىنىقى ئىشلىتىلدى. *P< 0.05، **P< 0.01، ۋە ***Pسانلىق مەلۇماتلارنىڭ تارقىلىشىغا ئاساسەن < 0.001 بولغانلار ستاتىستىكىلىق جەھەتتىن مۇھىم دەپ قارالدى. Kd، Ki قىممەتلىرى ۋە ئۇلارنىڭ ئاسسىمېترىك 95% ئىشەنچلىك ئارىلىقى GraphPad Prism 10 ئارقىلىق ھېسابلىنىدۇ.
تەتقىقات ئۇسۇلى ھەققىدە تېخىمۇ كۆپ تەپسىلاتلار ئۈچۈن، بۇ ماقالىدىكى «تەبىئەت پورتفېلى دوكلاتىنىڭ قىسقىچە مەزمۇنى» نى كۆرۈڭ.
دەسلەپكى مودېل PDB 4JPZ ۋە 1CFD سانلىق مەلۇمات ئامبىرىدىكى كالمودۇلىن مودېللىرى ئارقىلىق ياسالغان. كوئوردېناتلار 9NVN (لىگاندسىز Nan-Iav-CaM)، 9NVO (نىكوتىنامىتقا باغلانغان Nan-Iav-CaM)، 9NVP (نىكوتىنامىت ۋە EDTAغا باغلانغان Nan-Iav-CaM)، 9NVQ (ئافېنىدولپىرروللىن ۋە كالتسىيغا باغلانغان Nan-Iav-CaM)، 9NVR (ئافېنىدولپىرروللىن ۋە EDTAغا باغلانغان Nan-Iav-CaM) ۋە 9NVS (ئافېنىدولپىرروللىنغا باغلانغان Nan pentamer) قاتارلىق نومۇرلار ئاستىدا ئاقسىل سانلىق مەلۇمات ئامبىرىغا (PDB) ساقلاندى. ماس كېلىدىغان توڭلىتىلغان ئېلېكترون مىكروسكوپ رەسىملىرى ئېلېكترون مىكروسكوپ سانلىق مەلۇمات ئامبىرىغا (EMDB) تۆۋەندىكى نومۇرلار ئاستىدا ساقلىنىدۇ: EMD-49844 (لىگاندسىز Nan-Iav-CaM)، EMD-49845 (نىكوتىنامىت قوشۇلغان Nan-Iav-CaM بىرىكمىسى)، EMD-49846 (نىكوتىنامىت ۋە EDTA قوشۇلغان Nan-Iav-CaM بىرىكمىسى)، EMD-49847 (ئافىدوپىرروللىن ۋە كالتسىي قوشۇلغان Nan-Iav-CaM بىرىكمىسى)، EMD-49848 (ئافىدوپىرروللىن ۋە EDTA قوشۇلغان Nan-Iav-CaM بىرىكمىسى) ۋە EMD-49849 (ئافىدوپىرروللىن قوشۇلغان Nan pentamer بىرىكمىسى). فۇنكسىيەلىك ئانالىزنىڭ خام سانلىق مەلۇماتلىرى بۇ ماقالىدە كۆرسىتىلدى.
ئېلان قىلىنغان ۋاقىت: 2026-يىلى 1-ئاينىڭ 28-كۈنى