مىقدارلاشقان گىببېرېللىن بىيو سېنزور گىببېرېللىننىڭ ئېتىش تىپىدىكى مېرېستىمدىكى Internode ئۆلچىمىدىكى رولىنى ئاشكارىلىدى.

غول بىناكارلىق ئۈچۈن ئېپىزلىق مېرستىم (SAM) نىڭ ئۆسۈشى ئىنتايىن مۇھىم. ئۆسۈملۈك ھورمۇنىgibberellins(GA) ئۆسۈملۈكلەرنىڭ ئۆسۈشىنى ماسلاشتۇرۇشتا مۇھىم رول ئوينايدۇ ، ئەمما ئۇلارنىڭ SAM دىكى رولى يەنىلا ياخشى چۈشىنىلمىدى. بۇ يەردە ، بىز DELLA ئاقسىلىنى ئىنژېنېرلىق قىلىش ئارقىلىق GA سىگنالىنىڭ رادىئاتسىيەلىك بىئولوگىيىلىك سېنزورنى تەتقىق قىلىپ ياساپ چىقتۇق ، شۇنىڭ بىلەن بىرگە GA نىڭ ئېتىراپ قىلىنىشىدىكى ناچارلىشىشنى ساقلاپ قالدۇق. بىز بۇ بۇزۇلۇشنى ئاساس قىلغان بىئولوگىيىلىك سېنزورنىڭ تەرەققىيات جەريانىدا GA سەۋىيىسىدىكى ئۆزگىرىش ۋە ھۈجەيرە سېزىمىنى توغرا خاتىرىلىگەنلىكىنى كۆرسىتىمىز. بىز بۇ بىئولوگىيىلىك سېنزورنى ئىشلىتىپ SAM دىكى GA سىگنال پائالىيىتىنى خەرىتە قىلدۇق. بىز يۇقىرى GA سىگنالىنىڭ كۆپىنچە ئەزالارنىڭ ئىپتىدائىي ئارىلىقىغا جايلاشقان ھۈجەيرىلەردە بارلىقىنى كۆرسىتىپ بېرىمىز ، بۇلار ئىچكى ھۈجەيرىلەرنىڭ ئالدىن بېشارىتى. ئىقتىدارنى ئاشۇرۇش ۋە يوقىتىش ئۇسۇلىنى قوللىنىش ئارقىلىق ، GA نىڭ ھۈجەيرە بۆلۈش ئايروپىلانىنىڭ يۆنىلىشىنى تەڭشەيدىغانلىقىنى ، ئىنتېرنېت تورىنىڭ قانون ھۈجەيرىسىنى تەشكىل قىلىدىغانلىقىنى ، بۇ ئارقىلىق SAM دىكى ئىنتېرنېت ئۆلچىمىنى ئىلگىرى سۈرىدىغانلىقىنى تېخىمۇ نامايان قىلىمىز.
ئېتىشنىڭ يۇقىرى پەللىسىگە جايلاشقان ئېتىش ئاپپاق مېرستىمىسى (SAM) غول ھۈجەيرىلەرنىڭ بىر قىسمىنى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ ، ئۇلارنىڭ پائالىيىتى ئۆسۈملۈك ھاياتىدا مودۇل ۋە تەكرارلىنىش شەكلىدە يان ئەزا ۋە غول تۈگۈن ھاسىل قىلىدۇ. بۇ تەكرارلانغان ئورۇنلارنىڭ ياكى ئۆسۈملۈك تۈگۈنىنىڭ ھەر بىرى تۈگۈندىكى ئىچكى ئەزا ۋە يان ئەزا ۋە يوپۇرماق ئوقلىرىدىكى ئوق مېرېمىنى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ. ئۆسۈملۈك تۈگۈنلىرىنىڭ ئۆسۈشى ۋە تەشكىللىنىشى تەرەققىيات جەريانىدا ئۆزگىرىدۇ. Arabidopsis دا ، ئۆسۈملۈكلەر ئۆسۈپ يېتىلىش باسقۇچىدا بالىياتقۇنىڭ ئۆسۈشى بېسىلىدۇ ، قىزىلگۈل يوپۇرمىقىنىڭ ئوقىدا ئوق مېرسىمى ئۇيقۇسىز ھالەتتە تۇرىدۇ. گۈل باسقۇچىغا ئۆتۈش جەريانىدا ، SAM پۇل پاخاللىقى مېرستىمىسىغا ئايلىنىپ ، ئۇزۇنغا سوزۇلغان ئىچكى ئەزا ۋە ئوق غولى ، كاۋا يوپۇرمىقىنىڭ ئوقىدا شاخ ، كېيىن يوپۇرماقسىز گۈل ھاسىل قىلىدۇ. گەرچە بىز يوپۇرماق ، گۈل ۋە شاخلارنىڭ باشلىنىشىنى كونترول قىلىدىغان مېخانىزىمنى چۈشىنىشتە كۆرۈنەرلىك ئىلگىرىلەشلەرنى قولغا كەلتۈرگەن بولساقمۇ ، ئەمما ئىچكى ئەزالارنىڭ قانداق پەيدا بولىدىغانلىقى توغرىسىدا بىر قەدەر ئاز بىلىنگەن.
GA نىڭ بوشلۇقتىكى تارقىلىشىنى چۈشىنىش بۇ ھورموننىڭ ئوخشىمىغان توقۇلمىلاردىكى ۋە ئوخشىمىغان تەرەققىيات باسقۇچىدىكى رولىنى تېخىمۇ ياخشى چۈشىنىشكە ياردەم بېرىدۇ. ئۆزىنىڭ تەشۋىق قىلغۇچىنىڭ ھەرىكىتىدە ئىپادىلەنگەن RGA-GFP بىرىكىشىنىڭ بۇزۇلۇشىنى تەسۋىرلەش 15،16 يىلتىزدىكى GA ئومۇمىي مىقدارىنى تەڭشەشكە مۇناسىۋەتلىك مۇھىم ئۇچۇرلار بىلەن تەمىنلەيدۇ. قانداقلا بولمىسۇن ، RGA ئىپادىسى توقۇلمىلاردا ئوخشىمايدۇ 17 ۋە GA18 تەرىپىدىن تەڭشىلىدۇ. شۇڭا ، RGA تەشۋىق قىلغۇچىنىڭ پەرقلىق ئىپادىلىنىشى RGA-GFP بىلەن كۆزىتىلگەن فلۇئورېسسېنسىيە ئەندىزىسىنى كەلتۈرۈپ چىقىرىشى مۇمكىن ، شۇڭا بۇ ئۇسۇل مىقدار ئەمەس. يېقىندىن بۇيان ، بىيوئاكتىپلىق فلۇئورېسسېن (Fl) بەلگىسى بار GA19,20 GA نىڭ يىلتىز ئىچكى پەردىسىدە يىغىلىپ قالغانلىقى ۋە GA ترانسپورتى ئارقىلىق ئۇنىڭ ھۈجەيرە سەۋىيىسىنىڭ تەڭشىلىدىغانلىقىنى ئاشكارىلىدى. يېقىندا ، GA FRET سېنزورى nlsGPS1 نىڭ كۆرسىتىشىچە ، GA سەۋىيىسى يىلتىز ، ئىنچىكە ۋە قاراڭغۇ ئۆسكەن قاندىكى ماينىڭ ھۈجەيرىسىنىڭ ئۇزىرىشى بىلەن مۇناسىۋەتلىك. قانداقلا بولمىسۇن ، كۆرگىنىمىزدەك ، GA نىڭ قويۇقلۇقى GA سىگنال پائالىيىتىنى كونترول قىلىدىغان بىردىنبىر پارامېتىر ئەمەس ، چۈنكى ئۇ مۇرەككەپ سېزىش جەريانىغا باغلىق. بۇ يەردە ، بىزنىڭ DELLA ۋە GA سىگنال يولىنى چۈشىنىشىمىزنى ئاساس قىلىپ ، GA سىگنالىنىڭ چېكىنىشنى ئاساس قىلغان رادىئولوگىيىلىك بىئولوگىيىلىك سېنزورنىڭ تەرەققىياتى ۋە ئالاھىدىلىكىنى دوكلات قىلىمىز. بۇ مىقداردىكى بىئولوگىيىلىك سېنزورنى تەرەققىي قىلدۇرۇش ئۈچۈن ، بىز فتور فېرمېنسىمان ئاقسىلغا بىرىكتۈرۈلگەن ۋە توقۇلمىلاردا ھەممە جايدا ئىپادىلەنگەن ئۆزگىرىشچان GA سەزگۈر RGA نى ئىشلەتتۇق ، شۇنداقلا GA سەزگۈر فلۇئورېسسېنسىيە ئاقسىلىنى ئىشلەتتۇق. بىز ئۆزگىرىشچان RGA ئاقسىلنىڭ بىرىكىشىنىڭ ھەممىلا جايدا ئىپادىلەنگەندە ئۆزلۈكىدىن GA سىگنالىغا دەخلى قىلمايدىغانلىقىنى ، بۇ بىئولوگىيىلىك سېنزورنىڭ سېزىمچان ئۈسكۈنىنىڭ GA كىرگۈزۈش ۋە GA سىگنال بىر تەرەپ قىلىش نەتىجىسىدىن كېلىپ چىققان سىگنال پائالىيىتىنى يۇقىرى بوشلۇقتىكى ئېنىقلىق دەرىجىسى بىلەن مىقدارلاشتۇرالايدىغانلىقىنى كۆرسىتىمىز. بىز بۇ بىئولوگىيىلىك سېنزور ئارقىلىق GA سىگنال بېرىش پائالىيىتىنىڭ بوشلۇقتىكى تارقىلىشىنى خەرىتە قىلىپ ، GA نىڭ SAM تارقىلىشچان ھۈجەيرىسىدىكى ھۈجەيرە ھەرىكىتىنى قانداق تەڭشەيدىغانلىقىنى ئېنىقلىدۇق. بىز GA نىڭ ئورگان ئىپتىدائىي ئارىلىقىغا جايلاشقان SAM ھۈجەيرىسىنىڭ بۆلۈش ئايروپىلانىنىڭ يۆنىلىشىنى تەڭشەيدىغانلىقىنى ، شۇ ئارقىلىق ئىچكى ئەزانىڭ قانون ھۈجەيرىسىنى تەشكىل قىلىدىغانلىقىنى بەلگىلەيمىز.
ئاخىرىدا ، بىز qmRGA نىڭ ئۆسۈپ يېتىلىۋاتقان گىكوكوتېل ئارقىلىق ئىچكى مەنبەلىك GA سەۋىيىسىدىكى ئۆزگىرىشلەرنى دوكلات قىلالايدىغان ياكى قىلالمايدىغانلىقىنى سورىدۇق. بىز ئىلگىرى نىتراتنىڭ GA بىرىكتۈرۈشنى ئاشۇرۇش ۋە ئۆز نۆۋىتىدە DELLA34 نىڭ تۆۋەنلىشىنى ئاشۇرۇش ئارقىلىق ئۆسۈشنى جانلاندۇرىدىغانلىقىنى كۆرسىتىپ ئۆتتۇق. بۇنىڭغا ئاساسەن ، بىز مول نىترات بىلەن تەمىنلەش (10 mM NO3−) ئاستىدا ئۆستۈرۈلگەن pUBQ10 :: qmRGA مايسىسىدىكى گىكوكوتېلنىڭ ئۇزۇنلۇقى نىترات كەمچىل شارائىتتا ئۆستۈرۈلگەن مايسىلارنىڭكىدىن كۆرۈنەرلىك ئۇزۇن ئىكەنلىكىنى بايقىدۇق (قوشۇمچە 6a رەسىم). ئۆسۈش ئىنكاسىغا ماس ھالدا ، GA سىگنالى 10 mM NO3− شارائىتىدا ئۆستۈرۈلگەن مايسىلارنىڭ گىكوكوتېلدا نىترات بولمىغان ئەھۋالدا ئۆستۈرۈلگەن مايسىلارغا قارىغاندا يۇقىرىراق (قوشۇمچە 6b ، c). شۇڭا ، qmRGA يەنە GA قويۇقلۇقىنىڭ ئىچكى ئۆزگىرىشى كەلتۈرۈپ چىقارغان GA سىگنالىدىكى ئۆزگىرىشلەرنى نازارەت قىلىشقا ياردەم بېرىدۇ.
QmRGA تەرىپىدىن بايقالغان GA سىگنال پائالىيىتىنىڭ GA قويۇقلۇقى ۋە GA تونۇشىغا باغلىق ياكى ئەمەسلىكىنى چۈشىنىش ئۈچۈن ، سېنزور لايىھىسىگە ئاساسەن مۆلچەردىكىدەك ، بىز ئۈچ GID1 قوبۇللىغۇچنىڭ ئۆسۈملۈك ۋە كۆپىيىش توقۇلمىلىرىدىكى ئىپادىسىنى تەھلىل قىلدۇق. كۆچەتلەردە ، GID1-GUS مۇخبىرلار لىنىيىسىدە GID1a ۋە c نىڭ كوتېلېدوندا يۇقىرى ئىپادىلەنگەنلىكى كۆرسىتىلدى (3a - c). ئۇنىڭدىن باشقا ، ئۈچ خىل قوبۇللىغۇچنىڭ ھەممىسى يوپۇرماق ، يان يىلتىز ئىپتىدائىي كېسەللىكى ، يىلتىز ئۇچى (GID1b نىڭ يىلتىز قالپىقىدىن باشقا) ۋە قان تومۇر سىستېمىسىدا ئىپادىلەنگەن (3a - c رەسىم). پۇل پاخاللىقى SAM دا ، بىز پەقەت GID1b ۋە 1c ئۈچۈن GUS سىگنالىنى بايقىدۇق (قوشۇمچە 7a - c). دەل جايىدا بىرىكتۈرۈش بۇ ئىپادىلەش ئەندىزىسىنى دەلىللىدى ۋە GID1c نىڭ SAM نىڭ تۆۋەن سەۋىيىسىدە بىردەك ئىپادىلەنگەنلىكىنى تېخىمۇ ئىسپاتلىدى ، ھالبۇكى GID1b بولسا SAM نىڭ ئەتراپىدا تېخىمۇ يۇقىرى ئىپادىنى كۆرسەتتى (قوشۇمچە رەسىم 7d - l). PGID1b :: 2xmTQ2-GID1b تەرجىمە بىرىكمىسى يەنە GID1b ئىپادىلەش دەرىجىسىنىڭ دەرىجىسىنى ئاشكارىلىدى ، SAM نىڭ مەركىزىدىكى تۆۋەن ياكى ئىپادىلىنىشتىن تارتىپ ئورگان چېگراسىدىكى يۇقىرى ئىپادىلىنىشكىچە (قوشۇمچە 7m رەسىم). شۇڭا ، GID1 قوبۇللىغۇچ توقۇلمىلارنىڭ ئىچىدە ۋە توقۇلمىلاردا بىردەك تارقىتىلمايدۇ. كېيىنكى تەجرىبىلەردە ، بىز يەنە GID1 (pUBQ10 :: GID1a-mCherry) نىڭ ھەددىدىن زىيادە بېسىم قىلىشىنىڭ قاندىكى قەنت تەركىبىدىكى qmRGA نىڭ سىرتقى GA قوللىنىشچانلىقىغا بولغان سەزگۈرلۈكىنى ئاشۇرغانلىقىنى بايقىدۇق (رەسىم 3d ، e). بۇنىڭغا سېلىشتۇرغاندا ، گىپوكوتېلدىكى qd17mRGA بىلەن ئۆلچەنگەن فلۇئورېسسېنسىيە GA3 داۋالاشقا نىسبەتەن سەزگۈر ئەمەس (رەسىم 3f ، g). ھەر ئىككى خىل تەكشۈرۈشتە ، مايسىلار يۇقىرى قويۇقلۇقتىكى GA (100 μM GA3) بىلەن بىر تەرەپ قىلىنىپ ، سېنزورنىڭ تېز ھەرىكىتىنى باھالىدى ، بۇ يەردە GID1 قوبۇللىغۇچ بىلەن باغلىنىش ئىقتىدارى يۇقىرى كۆتۈرۈلدى ياكى يوقىتىلدى. بۇ نەتىجىلەر بىرلىكتە ، qmRGA بىئولوگىيىلىك سېنزورنىڭ GA ۋە GA سېنزورى سۈپىتىدە بىرلەشتۈرۈلگەن ئىقتىدارغا خىزمەت قىلىدىغانلىقىنى ئىسپاتلايدۇ ، ھەمدە GID1 قوبۇللىغۇچنىڭ پەرقلىق ئىپادىلىنىشى سېنزورنىڭ تارقىلىشچانلىقىنى كۆرۈنەرلىك ئۆزگەرتەلەيدىغانلىقىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ.
ھازىرغا قەدەر ، SAM دىكى GA سىگنالىنىڭ تارقىلىشى ئېنىق ئەمەس. شۇڭلاشقا ، بىز qmRGA ئىپادىلەيدىغان ئۆسۈملۈك ۋە pCLV3 :: mCherry-NLS غول ھۈجەيرە مۇخبىرى 35 نى ئىشلىتىپ GA سىگنال بېرىش پائالىيىتىنىڭ يۇقىرى ئېنىقلىقتىكى مىقدار خەرىتىسىنى ھېسابلاپ ، L1 قەۋىتىگە دىققەت قىلدۇق (epidermis; رەسىم 4a ، b ، ئۇسۇل ۋە قوشۇمچە ئۇسۇللارغا قاراڭ) ، چۈنكى L1 SAM نىڭ ئۆسۈشىنى كونترول قىلىشتا مۇھىم رول ئوينايدۇ. بۇ يەردە pCLV3 :: mCherry-NLS ئىپادىسى GA سىگنال پائالىيىتىنىڭ بوشلۇقتىكى تارقىلىشىنى ئانالىز قىلىش ئۈچۈن مۇقىم گېئومېتىرىيەلىك پايدىلىنىش نۇقتىسى بىلەن تەمىنلىدى. گەرچە GA يان تەرەپتىكى ئەزالارنى تەرەققىي قىلدۇرۇشتا موھىم دەپ قارالسىمۇ ، ئەمما بىز P3 باسقۇچىدىن باشلاپ گۈل ئىپتىدائىي (P) دا GA سىگنالىنىڭ تۆۋەنلىكىنى بايقىدۇق (رەسىم 4a ، b) ، ھالبۇكى ياش P1 ۋە P2 ئىپتىدائىي ئورۇنلارنىڭ ئوتتۇرا رايوندىكىگە ئوخشاش ئوتتۇراھال پائالىيىتى بار (4a ، b). GA نىڭ يۇقىرى سىگنال بېرىش پائالىيىتى P1 / P2 دىن باشلىنىپ (چېگرانىڭ يان تەرىپىدە) ۋە P4 دە يۇقىرى پەللىگە چىققاندىن كېيىن ، شۇنداقلا ئىپتىدائىي رايونغا جايلاشقان ئەتراپتىكى بارلىق ھۈجەيرىلەردە بايقالغان (4a رەسىم ، b ۋە قوشۇمچە 8a ، b). بۇ تېخىمۇ يۇقىرى GA سىگنال بېرىش پائالىيىتى يۇقۇملۇق كېسەلدىلا ئەمەس ، L2 ۋە ئۈستۈنكى L3 قەۋىتىدىمۇ كۆرۈلگەن (قوشۇمچە 8b رەسىم). QAMRGA ئارقىلىق SAM دا بايقالغان GA سىگنالىنىڭ ئەندىزىسىمۇ ۋاقىتنىڭ ئۆتۈشىگە ئەگىشىپ ئۆزگەرمىدى (قوشۇمچە رەسىم 8c - f ، k). گەرچە qd17mRGA قۇرۇلمىسى T3 ئۆسۈملۈكلىرىنىڭ SAM سىستېمىسىدا بىز تەپسىلىي بايان قىلغان بەش مۇستەقىل لىنىيىدىن سىستېمىلىق تەڭشەلگەن بولسىمۇ ، بىز pRPS5a :: VENUS-2A-TagBFP قۇرۇلمىسى (قوشۇمچە رەسىم 8g - j ، l) ئارقىلىق ئېرىشىلگەن فلۇئورېسسېنسىيە ئەندىزىسىنى تەھلىل قىلالىدۇق. بۇ كونترول لىنىيىسىدە ، SAM دا پەقەت فلۇئورېسسېنسىيە نىسبىتىدىكى كىچىك ئۆزگىرىشلەر بايقالدى ، ئەمما SAM مەركىزىدە بىز TagBFP بىلەن مۇناسىۋەتلىك VENUS نىڭ ئېنىق ۋە ئويلىمىغان يەردىن تۆۋەنلىگەنلىكىنى بايقىدۇق. بۇ qmRGA كۆزىتىدىغان سىگنال ئەندىزىسىنىڭ GA غا تايىنىشنىڭ mRGA-VENUS نىڭ تۆۋەنلىشىنى ئەكىس ئەتتۈرىدىغانلىقىنى ئىسپاتلايدۇ ، ئەمما qmRGA نىڭ meristem مەركىزىدىكى GA سىگنال پائالىيىتىنى ھەددىدىن زىيادە يۇقىرى مۆلچەرلىگەنلىكىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ. خۇلاسىلەپ ئېيتقاندا ، بىزنىڭ نەتىجىمىز ئاساسلىقى ئىپتىدائىي تارقىلىشنى ئەكىس ئەتتۈرىدىغان GA سىگنال ئەندىزىسىنى ئاشكارىلىدى. ئىپتىدائىي رايون (IPR) نىڭ بۇ تارقىلىشى تەرەققىي قىلىۋاتقان ئىپتىدائىي رايون بىلەن ئوتتۇرا رايون ئوتتۇرىسىدا GA سىگنال بېرىش ھەرىكىتىنىڭ تەدرىجىي بەرپا قىلىنىشى بىلەن مۇناسىۋەتلىك ، شۇنىڭ بىلەن بىر ۋاقىتتا ئىپتىدائىي رايوندىكى GA سىگنال پائالىيىتى تۆۋەنلەيدۇ (4c رەسىم ، d).
GID1b ۋە GID1c قوبۇللىغۇچنىڭ تارقىلىشى (يۇقىرىغا قاراڭ) GA قوبۇللىغۇچنىڭ پەرقلىق ئىپادىلىنىشىنىڭ SAM دىكى GA سىگنال پائالىيىتى ئەندىزىسىنى شەكىللەندۈرۈشكە ياردىمى بارلىقىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ. بىز GA نىڭ پەرقلىق يىغىلىشىغا چېتىشلىقمۇ-يوق ، دەپ ئويلىدۇق. بۇ ئېھتىماللىقنى تەكشۈرۈش ئۈچۈن ، بىز nlsGPS1 GA FRET سېنزورنى ئىشلەتتۇق. 10 μM GA4 + 7 بىلەن 100 مىنۇتتا بىر تەرەپ قىلىنغان nlsGPS1 نىڭ SAM دا ئاكتىپلاش چاستوتىسىنىڭ يۇقىرى كۆتۈرۈلگەنلىكى بايقالدى (قوشۇمچە رەسىم 9a - e) ، بۇ nlsGPS1 نىڭ SAM دىكى GA قويۇقلۇقىنىڭ ئۆزگىرىشىگە ئىنكاس قايتۇرىدىغانلىقىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ. NlsGPS1 قوزغىتىش چاستوتىسىنىڭ بوشلۇقتىكى تارقىلىشى SAM نىڭ سىرتقى قەۋىتىدە GA سەۋىيىسىنىڭ بىر قەدەر تۆۋەنلىكىنى ئاشكارىلىدى ، ئەمما ئۇلارنىڭ SAM نىڭ مەركىزى ۋە چېگرىسىدا يۇقىرى كۆتۈرۈلگەنلىكىنى كۆرسەتتى (4e رەسىم ۋە قوشۇمچە رەسىم 9a ، c). بۇ GA نىڭ SAM دا qmRGA ئاشكارىلىغان بوشلۇق بىلەن سېلىشتۇرۇلغان بوشلۇق شەكلىدە تارقىتىلغانلىقىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ. بىر-بىرىنى تولۇقلاش ئۇسۇلى سۈپىتىدە ، بىز SAM نى فلۇئورېسسېنسىيە GA (GA3-, GA4-, GA7-Fl) ياكى Fl بىلەن يالغۇز سەلبىي كونترول دەپ قارىدۇق. Fl سىگنالى تۆۋەن دەرىجىدىكى بولسىمۇ ، ئوتتۇرا رايون ۋە ئىپتىدائىي رايوننى ئۆز ئىچىگە ئالغان پۈتكۈل SAM غا تارقىتىلدى (4j رەسىم ۋە قوشۇمچە 10d رەسىم). بۇنىڭغا سېلىشتۇرغاندا ، GA-Fl نىڭ ھەممىسى ئىپتىدائىي چېگرا ئىچىدە ۋە باشقا IPR دا ئوخشىمىغان دەرىجىدە توپلانغان ، GA7-Fl بولسا IPR دىكى ئەڭ چوڭ ساھەدە توپلانغان (4k رەسىم ۋە قوشۇمچە رەسىم 10a ، b). فلۇئورېسسېنسىيەنىڭ كۈچلۈكلۈك دەرىجىسىنىڭ ئېنىقلىنىشى شۇنى ئىسپاتلىدىكى ، IP دا IPR بولمىغان كۈچلۈكلۈك نىسبىتى GA-Fl دا ئىشلىتىلگەن SAM دا Fl داۋالانغان SAM غا سېلىشتۇرغاندا تېخىمۇ يۇقىرى (4l رەسىم ۋە قوشۇمچە 10c رەسىم). بۇ نەتىجىلەر بىرلىكتە GA نىڭ ئورگان چېگراسىغا ئەڭ يېقىن بولغان IPR ھۈجەيرىسىدە تېخىمۇ قويۇقلۇقى بارلىقىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ. بۇ SAM GA سىگنال بېرىش پائالىيىتى ئەندىزىسىنىڭ GA قوبۇللىغۇچنىڭ ئوخشىمىغان ئىپادىلىنىشى ۋە GA نىڭ ئورگان چېگرىسىغا يېقىن IPR ھۈجەيرىسىدە پەرقلىق يىغىلىشىدىن كەلگەنلىكىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ. شۇڭا ، تەھلىلىمىز GA سىگنالىنىڭ كۈتۈلمىگەن بوشلۇق ئەندىزىسىنى ئاشكارىلىدى ، SAM نىڭ مەركىزى ۋە ئىپتىدائىي پائالىيىتى تۆۋەنرەك ، ئەتراپتىكى IPR دىكى پائالىيەت تېخىمۇ يۇقىرى.
پەرقلىق GA سىگنال پائالىيىتىنىڭ SAM دىكى رولىنى چۈشىنىش ئۈچۈن ، بىز GA سىگنال بېرىش پائالىيىتى ، ھۈجەيرىلەرنىڭ كېڭىيىشى ۋە ھۈجەيرە بۆلۈنۈشى ئوتتۇرىسىدىكى باغلىنىشنى SAM qmRGA pCLV3 :: mCherry-NLS نىڭ دەل ۋاقتىدا تەسۋىر ھاسىل قىلىش ئارقىلىق تەھلىل قىلدۇق. GA نىڭ ئۆسۈشنى تەڭشەشتىكى رولىنى ئويلاشقاندا ، ھۈجەيرىلەرنىڭ كېڭىيىش پارامېتىرلىرى بىلەن ئاكتىپ باغلىنىش مۆلچەرلەندى. شۇڭلاشقا ، بىز ئالدى بىلەن GA سىگنال بېرىش پائالىيەت خەرىتىسىنى ھۈجەيرە يۈزىنىڭ ئۆسۈش سۈرئىتىنىڭ خەرىتىسى (مەلۇم بىر ھۈجەيرە ۋە بۆلۈنگەن قىزلار ھۈجەيرىسىنىڭ كېڭىيىشىنىڭ كۈچلۈكلۈكىنىڭ ۋاكالەتچىسى سۈپىتىدە) ۋە ھۈجەيرىلەرنىڭ كېڭىيىش يۆنىلىشىنى ئۆلچەيدىغان ئۆسۈش ئانسوتروپىنىڭ خەرىتىسى بىلەن سېلىشتۇردۇق (بۇ يەردە بېرىلگەن ھۈجەيرە ۋە بۆلۈنگەن قىزلار ھۈجەيرىسى ئۈچۈنمۇ ئىشلىتىلىدۇ ؛ 5a ، b ، ئۇسۇل ۋە قوشۇمچە ئۇسۇللارغا قاراڭ). بىزنىڭ SAM ھۈجەيرىسىنىڭ يەر يۈزىنىڭ ئېشىش سۈرئىتىنىڭ خەرىتىلىرى ئىلگىرىكى كۆزىتىشلەر بىلەن بىردەك بولۇپ ، 38،39 ، چېگرادىكى ئەڭ تۆۋەن ئېشىش سۈرئىتى ۋە گۈللەرنىڭ ئۆسۈپ يېتىلىش نىسبىتى ئەڭ يۇقىرى (5a رەسىم). ئاساسلىق زاپچاس ئانالىزى (PCA) GA سىگىنال پائالىيىتىنىڭ ھۈجەيرە يۈزىنىڭ ئۆسۈشى بىلەن سەلبىي باغلىنىشلىق ئىكەنلىكىنى كۆرسەتتى (5c رەسىم). بىز يەنە GA سىگنال كىرگۈزۈش ۋە ئۆسۈشنىڭ كۈچلۈكلۈك دەرىجىسىنى ئۆز ئىچىگە ئالغان ئاساسلىق ئۆزگىرىش ئوقىنىڭ يۇقىرى CLV3 ئىپادىسى ئارقىلىق بېكىتىلگەن يۆنىلىشكە توغرىلانغانلىقىنى كۆرسىتىپ ، قالغان ئانالىزلاردا ھۈجەيرىلەرنىڭ SAM مەركىزىدىن چىقىرىۋېتىلگەنلىكىنى ئىسپاتلىدۇق. نەيزە باغلىنىشلىق ئانالىز PCA نەتىجىسىنى دەلىللىدى (5d رەسىم) ، بۇ IPR دىكى تېخىمۇ يۇقىرى GA سىگنالىنىڭ ھۈجەيرىلەرنىڭ كېڭىيىشىنى كەلتۈرۈپ چىقارمىغانلىقىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ. قانداقلا بولمىسۇن ، باغلىنىش ئانالىزى GA سىگنال پائالىيىتى بىلەن ئۆسۈش ئانسوتروپىيىسى ئوتتۇرىسىدا ئازراق ئىجابىي باغلىنىشنى بايقىدى (5c ، d) ، بۇ IPR دىكى تېخىمۇ يۇقىرى GA سىگنالىنىڭ ھۈجەيرىلەرنىڭ ئۆسۈپ يېتىلىش يۆنىلىشىگە تەسىر كۆرسىتىدىغانلىقىنى ۋە بەلكىم ھۈجەيرە بۆلۈش ئايروپىلانىنىڭ ئورنىغا تەسىر كۆرسىتىدىغانلىقىنى كۆرسىتىپ بەردى.
a, b SAM دىكى ئوتتۇرىچە يەر يۈزىنىڭ ئۆسۈشى (a) ۋە ئۆسۈش ئانسوتروپىنىڭ ئىسسىقلىق خەرىتىسى ئوتتۇرا ھېساب بىلەن يەتتە مۇستەقىل ئۆسۈملۈك (ئايرىم-ئايرىم ھالدا ھۈجەيرىلەرنىڭ كېڭىيىشىنىڭ كۈچى ۋە يۆنىلىشىنىڭ ۋاكالەتچىسى سۈپىتىدە ئىشلىتىلىدۇ). c PCA تەھلىلى تۆۋەندىكى ئۆزگىرىشچان مىقدارلارنى ئۆز ئىچىگە ئالدى: GA سىگىنالى ، يەر يۈزىنىڭ ئۆسۈش كۈچى ، يەر يۈزىنىڭ ئۆسۈشى ئانسوتروپى ۋە CLV3 ئىپادىسى. PCA 1-قىسمى ئاساسلىقى يەر يۈزىنىڭ ئۆسۈش سۈرئىتى بىلەن سەلبىي باغلىنىشلىق بولۇپ ، GA سىگىنالى بىلەن ئوڭ تاناسىپ باغلانغان. PCA 2-زاپچاسلىرى ئاساسلىقى يەر يۈزىنىڭ ئۆسۈشى ئانسوتروپى بىلەن ئوڭ تاناسىپ بولۇپ ، CLV3 ئىپادىسى بىلەن سەلبىي باغلىنىشلىق. پىرسەنت ھەر بىر زاپچاس چۈشەندۈرگەن ئۆزگىرىشنى كۆرسىتىدۇ. d نەيزە GA سىگنالى ، يەر يۈزىنىڭ ئۆسۈش كۈچلۈكلۈكى ۋە CZ نى ئۆز ئىچىگە ئالمىغان توقۇلما ئۆلچىمىدىكى يەر يۈزىنىڭ ئۆسۈشى ئانسوتروپى ئوتتۇرىسىدىكى باغلىنىش ئانالىزى. ئوڭ تەرەپتىكى سان بولسا ئىككى ئۆزگەرگۈچى مىقدار ئوتتۇرىسىدىكى Spearman rho قىممىتى. يۇلتۇزلار باغلىنىشى / مەنپىي باغلىنىشچانلىقى ئىنتايىن مۇھىم بولغان ئەھۋاللارنى كۆرسىتىدۇ. e ماسلاشتۇرۇلغان مىكروسكوپ ئارقىلىق Col-0 SAM L1 ھۈجەيرىسىنى 3D تەسۋىرلەش. SAM دا شەكىللەنگەن يېڭى ھۈجەيرە تاملىرى (ئەمما ئىپتىدائىي ئەمەس) 10 سائەتتە بۇلۇڭ قىممىتىگە ئاساسەن رەڭلىك بولىدۇ. رەڭلىك بالداق ئوڭ تەرەپ ئاستى بۇلۇڭدا كۆرسىتىلىدۇ. بۇ قىستۇرما 0 سائەتتە ماس كېلىدىغان 3D رەسىمنى كۆرسىتىدۇ. مۇشۇنىڭغا ئوخشاش نەتىجە بىلەن تەجرىبە ئىككى قېتىم تەكرارلاندى. f Box پىلاستىنكىلىرى IPR ۋە IPR ​​بولمىغان Col-0 SAM (n = 10 مۇستەقىل ئۆسۈملۈك) دە ھۈجەيرە بۆلۈش نىسبىتىنى كۆرسىتىدۇ. ئوتتۇرىدىكى سىزىق ئوتتۇراھالنى كۆرسىتىدۇ ، رامكا چېگرىسى 25 ۋە 75 پىرسەنتنى كۆرسىتىدۇ. ۋىۋىسكا R يۇمشاق دېتالى بىلەن بېكىتىلگەن ئەڭ تۆۋەن ۋە ئەڭ چوڭ قىممەتنى كۆرسىتىدۇ. P قىممىتى ۋېلچنىڭ ئىككى قۇيرۇقلۇق T سىنىقى بىلەن قولغا كەلتۈرۈلدى. g, h سىخېما دىئاگراممىسى (g) يېڭى ھۈجەيرە تېمىنىڭ (ماگېنتا) نىڭ SAM نىڭ مەركىزىدىن كەلگەن رادىئاتسىيە يۆنىلىشىگە قارىتا (ئاق چېكىتلىك سىزىق) (پەقەت ئۆتكۈر بۇلۇڭ قىممىتى ، يەنى 0 ~ 90 ° دەپ قارىلىدۇ) ، ۋە (h) مېرسىزىم ئىچىدىكى ئايلانما / يان ۋە رادىئاتسىيە يۆنىلىشىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ. i ئايرىم-ئايرىم ھالدا SAM (قېنىق كۆك) ، IPR (ئوتتۇرا كۆك) ۋە IPR ​​بولمىغان (سۇس كۆك) ئارقىلىق ھۈجەيرە بۆلۈش ئايروپىلانى يۆنىلىشىنىڭ چاستوتا گىستوگراممىسى. P قىممىتى ئىككى قۇيرۇقلۇق كولموگوروف-سمىرنوۋ سىنىقى ئارقىلىق قولغا كەلتۈرۈلدى. مۇشۇنىڭغا ئوخشاش نەتىجە بىلەن تەجرىبە ئىككى قېتىم تەكرارلاندى. j IPR نىڭ P3 (سۇس يېشىل) ، P4 (ئوتتۇراھال يېشىل) ۋە P5 (قېنىق يېشىل) ئەتراپىدىكى IPR نىڭ ھۈجەيرە بۆلۈش تەكشى يۆنىلىشىنىڭ چاستوتا گىستوگراممىلىرى. P قىممىتى ئىككى قۇيرۇقلۇق كولموگوروف-سمىرنوۋ سىنىقى ئارقىلىق قولغا كەلتۈرۈلدى. مۇشۇنىڭغا ئوخشاش نەتىجە بىلەن تەجرىبە ئىككى قېتىم تەكرارلاندى.
شۇڭلاشقا ، بىز كېيىنكى قەدەمدە تەكشۈرۈش جەريانىدا يېڭى شەكىللەنگەن ھۈجەيرە تاملىرىنى پەرقلەندۈرۈش ئارقىلىق GA سىگنالى بىلەن ھۈجەيرە بۆلۈش پائالىيىتى ئوتتۇرىسىدىكى باغلىنىشنى تەكشۈردۇق (5e رەسىم). بۇ ئۇسۇل بىزگە ھۈجەيرە بۆلۈش قېتىم سانى ۋە يۆنىلىشىنى ئۆلچەشكە شارائىت ھازىرلاپ بەردى. ئەجەبلىنەرلىك يېرى شۇكى ، بىز IPR ۋە باشقا SAM دىكى ھۈجەيرە بۆلۈش قېتىم سانىنىڭ (IPR ئەمەس ، 5f رەسىم) ئوخشاشلىقىنى بايقىدۇق ، بۇ GA سىگنالىنىڭ IPR بىلەن IPR بولمىغان ھۈجەيرىلەر ئوتتۇرىسىدىكى پەرقنىڭ ھۈجەيرە بۆلۈنۈشىگە كۆرۈنەرلىك تەسىر كۆرسەتمەيدىغانلىقىنى كۆرسىتىپ بەردى. بۇ ، GA سىگنالى بىلەن ئۆسۈپ يېتىلىش ئانسوتروپى ئوتتۇرىسىدىكى ئاكتىپ باغلىنىش بىزنى GA سىگنال پائالىيىتىنىڭ ھۈجەيرە بۆلۈش ئايروپىلانىنىڭ يۆنىلىشىگە تەسىر كۆرسىتەلەيدىغان ياكى تەسىر كۆرسىتەلمەيدىغانلىقىنى ئويلىنىشقا ئۈندىدى. بىز يېڭى ھۈجەيرە دىۋارىنىڭ يۆنىلىشىنى مېرستېم مەركىزى بىلەن يېڭى ھۈجەيرە تېمىنىڭ مەركىزىنى تۇتاشتۇرىدىغان رادىئاتسىيە ئوقىغا سېلىشتۇرغاندا ئۆتكۈر بۇلۇڭ دەپ ئۆلچىدۇق (رەسىم 5e-i) ۋە ھۈجەيرىلەرنىڭ رادىئاتسىيە ئوقىغا سېلىشتۇرغاندا ° C 90 قا يېقىن بۇلۇڭدا بۆلۈنۈش يۈزلىنىشىنى ئېنىق كۆردۇق ، ئەڭ يۇقىرى چاستوتا 70-80 ° C (% 23.28) ۋە 80-90 ° (ئايلانما سىزىق). 5h). GA سىگنالىنىڭ بۇ ھۈجەيرە بۆلۈش ھەرىكىتىگە قوشقان تۆھپىسىنى تەكشۈرۈش ئۈچۈن ، بىز IPR ۋە IPR ​​بولمىغان ھۈجەيرە بۆلۈش پارامېتىرلىرىنى ئايرىم تەھلىل قىلدۇق (5i رەسىم). بىز IPR ھۈجەيرىسىدىكى بۆلۈش بۇلۇڭىنىڭ تارقىلىشىنىڭ IPR بولمىغان ھۈجەيرىلەردە ياكى پۈتكۈل SAM دىكى ھۈجەيرىلەردە ئوخشىمايدىغانلىقىنى ، IPR ھۈجەيرىسىنىڭ يان تەرەپتىكى / ئايلانما ھۈجەيرە بۆلۈنمىسىنىڭ تېخىمۇ يۇقىرى نىسبەتنى كۆرسىتىدىغانلىقىنى ، يەنى ئايرىم-ئايرىم ھالدا 70-80 ° ۋە 80-90 ° (ئايرىم-ئايرىم ھالدا% 33.86 ۋە% 30.71) (5-رەسىم). شۇڭا ، بىزنىڭ كۆزىتىشىمىز GA سىگنالى پائالىيىتى بىلەن ئۆسۈش ئانسوتروپىنىڭ باغلىنىشىغا ئوخشاش ، يۇقىرى GA سىگنالى بىلەن ئايلانما يۆنىلىشكە يېقىن ھۈجەيرە بۆلۈش ئايروپىلانى يۆنىلىشى ئوتتۇرىسىدىكى باغلىنىشنى ئاشكارىلىدى (رەسىم 5c ، d). بۇ جەمئىيەتنىڭ بوشلۇقنى قوغداشنى تېخىمۇ ئىلگىرى سۈرۈش ئۈچۈن ، بىز P4 دىن باشلاپ ئىپتىدائىي رايوننى چۆرىدىگەن IPR ھۈجەيرىسىدىكى بۆلۈش ئايروپىلانى يۆنىلىشىنى ئۆلچەپ چىقتۇق ، چۈنكى بۇ رايوندا ئەڭ يۇقىرى GA سىگنال بېرىش پائالىيىتى P4 دىن باشلانغان (4-رەسىم). IPR نىڭ P3 ۋە P4 ئەتراپىدىكى بۆلۈش بۇلۇڭىدا ستاتىستىكا جەھەتتە كۆرۈنەرلىك پەرق يوق ، گەرچە P4 ئەتراپىدىكى IPR دا يان تەرەپتىكى ھۈجەيرە بۆلۈش قېتىم سانى كۆپەيگەن (5j رەسىم). قانداقلا بولمىسۇن ، P5 ئەتراپىدىكى IPR ھۈجەيرىسىدە ، ھۈجەيرە بۆلۈش ئايروپىلانىنىڭ يۆنىلىشىدىكى پەرق ستاتىستىكىلىق ئەھمىيەتكە ئىگە بولۇپ ، تەتۈر ھۈجەيرە بۆلۈش قېتىم سانى شىددەت بىلەن ئاشتى (5j رەسىم). بۇ نەتىجىلەر بىرلىكتە GA سىگنالىنىڭ SAM دىكى ھۈجەيرە بۆلۈنمىسىنىڭ يۆنىلىشىنى كونترول قىلالايدىغانلىقىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ ، بۇ ئىلگىرىكى دوكلاتلارنىڭ 40،41 گە ماس كېلىدۇ ، يۇقىرى GA سىگنالى IPR دىكى ھۈجەيرە بۆلۈنمىسىنىڭ يان يۆنىلىشىنى كەلتۈرۈپ چىقىرىدۇ.
مۆلچەرلىنىشىچە ، IPR دىكى ھۈجەيرىلەر ئىپتىدائىي ھالەتكە كىرگۈزۈلمەي ، بەلكى ئىچكى ئەزالارغا 2،42،43 بولىدۇ. IPR دىكى ھۈجەيرە بۆلۈنمىسىنىڭ يۆتكىلىش يۆنىلىشى بەلكىم ئىچكى ئاجراتمىلاردىكى ئېپىدېرما ھۈجەيرىسىنىڭ پاراللېل ئۇزۇن سىزىقلىق تىپىك تەشكىللىنىشىنى كەلتۈرۈپ چىقىرىشى مۇمكىن. يۇقىرىدا بايان قىلىنغان كۆزىتىشلىرىمىز GA سىگنالىنىڭ ھۈجەيرە بۆلۈش يۆنىلىشىنى تەڭشەش ئارقىلىق بۇ جەرياندا رول ئوينايدىغانلىقىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ.
بىر نەچچە DELLA گېنىنىڭ ئىقتىدارىنىڭ يوقىلىشى تەشكىللىك GA ئىنكاسىنى كەلتۈرۈپ چىقىرىدۇ ، دېللا ئۆزگەرتكۈچى بۇ پەرەزنى سىناق قىلىشقا ئىشلىتىلىدۇ. بىز ئالدى بىلەن SAM دىكى بەش DELLA گېنىنىڭ ئىپادىلەش ئەندىزىسىنى تەھلىل قىلدۇق. GUS لىنىيىسىنىڭ 45 نىڭ ترانسكرىپسىيەلىك بىرىكىشى GAI ، RGA ، RGL1 ۋە RGL2 نىڭ (سەل تۆۋەنرەك) SAM دا ئىپادىلەنگەنلىكىنى ئاشكارىلىدى (قوشۇمچە 11a - d). ئەھۋالنى بىرلەشتۈرۈشتە GAI mRNA نىڭ ئىپتىدائىي ۋە گۈللەرنى تەرەققىي قىلدۇرىدىغانلىقى ئالاھىدە كۆرسىتىلدى (قوشۇمچە 11e رەسىم). RGL1 ۋە RGL3 mRNA پۈتكۈل SAM قوۋزىقى ۋە كونا گۈللەردە بايقالغان ، ھالبۇكى RGL2 mRNA چېگرا رايونىدا تېخىمۇ مول بولغان (قوشۇمچە 11f - h). PRGL3 نىڭ ماس قەدەملىك تەسۋىرى :: RGL3-GFP SAM دەل جايىدا بىرىكتۈرۈشتە كۆزىتىلگەن ئىپادىنى دەلىللىدى ھەمدە RGL3 ئاقسىلىنىڭ SAM نىڭ مەركىزى قىسمىغا يىغىلىدىغانلىقىنى كۆرسەتتى (قوشۇمچە 11i رەسىم). PRGA :: GFP-RGA لىنىيىسىنى ئىشلىتىپ ، بىز يەنە RGA ئاقسىلىنىڭ SAM دا يىغىلىدىغانلىقىنى بايقىدۇق ، ئەمما ئۇنىڭ موللىقى P4 دىن باشلاپ چېگرادا ئازىيىدۇ (قوشۇمچە 11j رەسىم). تىلغا ئېلىشقا ئەرزىيدىغىنى ، RGL3 ۋە RGA نىڭ ئىپادىلەش ئەندىزىسى qmRGA تەرىپىدىن بايقالغان IPR دىكى تېخىمۇ يۇقىرى GA سىگنال پائالىيىتى بىلەن بىردەك (4-رەسىم). ئۇنىڭ ئۈستىگە ، بۇ سانلىق مەلۇماتلار بارلىق DELLA لارنىڭ SAM دا ئىپادىلىنىدىغانلىقىنى ۋە ئۇلارنىڭ ئىپادىسىنىڭ پۈتكۈل SAM نى ئۆز ئىچىگە ئالىدىغانلىقىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ.
بىز كېيىنكى قەدەمدە ياۋا تىپتىكى SAM (Ler ، كونترول) ۋە gai-t6 rga-t2 rgl1-1 rgl2-1 rgl3-4 della quintuple (يەرشارى) ئۆزگىرىشىدىكى ھۈجەيرە بۆلۈش پارامېتىرلىرىنى تەھلىل قىلدۇق (6a ، b). قىزىقارلىق يېرى ، بىز دېللا يەرشارى ئۆزگىرىشچان SAM دىكى ياۋا تىپقا سېلىشتۇرغاندا ھۈجەيرە بۆلۈش بۇلۇڭ چاستوتىسىنىڭ تارقىلىشىدا ستاتىستىكىلىق ئەھمىيەتلىك ئۆزگىرىشنى كۆردۇق (6c رەسىم). دېللا يەرشارى ئۆزگىرىشىدىكى بۇ ئۆزگىرىش 80-90 ° بۇلۇڭنىڭ چاستوتىسى (% 34.71 بىلەن% 24.55) ۋە ئازراق بولسىمۇ 70-80 ° بۇلۇڭ (% 23.78 بىلەن% 20.18) ، يەنى تەتۈر ھۈجەيرە بۆلۈنۈشىگە ماس كەلگەن (6-رەسىم). دېللا يەرشارى ئۆزگىرىشىدىمۇ تەتۈر يۆنىلىشسىز بۆلۈش قېتىم سانى (0-60 °) تۆۋەنرەك (6c رەسىم). دېللا يەرشارى ئۆزگىرىشچان SAM دا تەتۈر ھۈجەيرە بۆلۈنۈش قېتىم سانى كۆرۈنەرلىك ئاشتى (6b رەسىم). ياۋا تىپقا سېلىشتۇرغاندا ، دېللا يەرشارى ئۆزگىرىشىدە IPR ​​دىكى تەتۈر ھۈجەيرە بۆلۈش قېتىم سانى تېخىمۇ يۇقىرى بولدى (6d رەسىم). IPR رايونىنىڭ سىرتىدا ، ياۋا تىپتا ھۈجەيرە بۆلۈش بۇلۇڭى بىر قەدەر تەكشى تەقسىملەنگەن ، ھالبۇكى دېللا يەرشارى ئۆزگىرىشى IPR غا ئوخشاش شەكىل بۆلۈشنى ياخشى كۆرىدۇ (6e رەسىم). بىز يەنە GA يىغىلىپ قالغان GA ئاكتىپسىز ئۆزگىرىشچان ئارقا كۆرۈنۈش (ga2ox1-1 ، ga2ox2-1 ، ga2ox3-1 ، ga2ox4-1 ۋە ga2ox6-2) نىڭ SAM دىكى ھۈجەيرە بۆلۈنمىسىنىڭ يۆنىلىشىنى مىقدارلاشتۇردۇق. GA سەۋىيىسىنىڭ ئۆسۈشىگە ماس ھالدا ، quintuple ga2ox ئۆزگىرىشچان پۇل پاخاللىقى SAM Col-0 نىڭكىدىن چوڭ بولدى (قوشۇمچە رەسىم 12a ، b) ، Col-0 غا سېلىشتۇرغاندا ، quintuple ga2ox SAM ھۈجەيرە بۆلۈش بۇلۇڭىنىڭ روشەن ئوخشىمايدىغان تەقسىملىنىشىنى كۆرسىتىپ بەردى ، يەنى بۇلۇڭ چاستوتىسى 50 ° تىن 90 ° C كە يەتتى. شۇڭا ، بىز GA سىگنالى ۋە GA يىغىلىشىنىڭ تەشكىللىك قوزغىتىلىشىنىڭ IPR ۋە باشقا SAM نىڭ يان تەرەپتىكى ھۈجەيرە بۆلۈنۈشىنى كەلتۈرۈپ چىقىرىدىغانلىقىنى كۆرسىتىمىز.
a, b 3D LI قەۋىتىنىڭ PI داغلانغان Ler (a) ۋە يەرشارىدىكى دېللا ئۆزگىرىشچان (b) SAM نىڭ ماسلاشتۇرۇلغان مىكروسكوپ ئارقىلىق تەسۋىرلىنىشى. 10 سائەت ئىچىدە SAM دا شەكىللەنگەن يېڭى ھۈجەيرە تاملىرى (ئەمما ئىپتىدائىي ئەمەس) ئۇلارنىڭ بۇلۇڭ قىممىتىگە ئاساسەن كۆرسىتىلىدۇ ۋە رەڭلىنىدۇ. قىستۇرما SAM نى 0 سائەتتە كۆرسىتىدۇ. رەڭلىك بالداق ئوڭ تەرەپ ئاستى بۇلۇڭدا كۆرسىتىلىدۇ. (B) دىكى يا ئوق يەرشارى دېللا ئۆزگىرىشىدىكى كاتەكچە ھۆججەتلەرنىڭ مىسالى. مۇشۇنىڭغا ئوخشاش نەتىجە بىلەن تەجرىبە ئىككى قېتىم تەكرارلاندى. ce SER (d) ، IPR (e) ۋە IPR ​​(f) دىكى Ler بىلەن يەرشارى دېللا ئارىسىدىكى ھۈجەيرە بۆلۈش ئايروپىلان يۆنىلىشىنىڭ چاستوتا تەقسىملىنىشىنى سېلىشتۇرۇش. P قىممىتى ئىككى قۇيرۇقلۇق كولموگوروف-سمىرنوۋ سىنىقىدىن پايدىلىنىپ قولغا كەلتۈرۈلدى. f, g Col-0 (i) ۋە pCUC2 :: gai-1-VENUS (j) گېنى يۆتكەلگەن ئۆسۈملۈكلەرنىڭ PI داغلانغان SAM نىڭ ماسلاشتۇرۇلغان رەسىملىرىنى 3D تەسۋىرلەش. تاختايلار (a, b) 10 سائەت ئىچىدە SAM دا شەكىللەنگەن يېڭى ھۈجەيرە تاملىرىنى كۆرسىتىدۇ (ئەمما ئىپتىدائىي ئەمەس). مۇشۇنىڭغا ئوخشاش نەتىجە بىلەن تەجرىبە ئىككى قېتىم تەكرارلاندى. h - j پۈتكۈل SAM (h) ، IPR (i) ۋە IPR ​​بولمىغان (j) دىكى Col-0 بىلەن pCUC2 :: gai-1-VENUS ئۆسۈملۈكلىرى ئارىسىدىكى ھۈجەيرە بۆلۈش ئايروپىلان يۆنىلىشىنىڭ چاستوتا تەقسىملىنىشىنى سېلىشتۇرۇش. P قىممىتى ئىككى قۇيرۇقلۇق كولموگوروف - سمىرنوۋ سىنىقىدىن پايدىلىنىپ قولغا كەلتۈرۈلدى.
بىز كېيىنكى قەدەمدە IPR ​​دا GA سىگنالىنى چەكلەش ئۈنۈمىنى سىنىدۇق. بۇنىڭ ئۈچۈن بىز كوتېلېدون لوڭقىسى 2 (CUC2) تەشۋىق قىلغۇچىدىن پايدىلىنىپ ، VENUS غا بىرىكتۈرۈلگەن ھۆكۈمران پاسسىپ گا -1 ئاقسىلنىڭ ئىپادىسىنى قوزغىدۇق (pCUC2 :: gai-1-VENUS لىنىيىسىدە). ياۋا تىپتىكى SAM دا ، CUC2 تەشۋىقاتچىسى SAM دىكى كۆپىنچە IPR ​​لارنىڭ ئىپادىسىنى قوزغىتىدۇ ، چېگرا ھۈجەيرىسىنى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ ، P4 دىن باشلاپ ، مۇشۇنىڭغا ئوخشاش كونكرېت ئىپادىلەش pCUC2 :: gai-1-VENUS ئۆسۈملۈكلىرىدە كۆرۈلگەن (تۆۋەندىكىلەرگە قاراڭ). PCUC2 :: gai-1-VENUS ئۆسۈملۈكلىرىنىڭ SAM ياكى IPR ئارقىلىق ھۈجەيرە بۆلۈش بۇلۇڭىنىڭ تارقىلىشى ياۋا تىپتىن كۆرۈنەرلىك پەرقلەنمەيتتى ، گەرچە ئويلىمىغان يەردىن بىز بۇ ئۆسۈملۈكلەردە IPR ​​بولمىغان ھۈجەيرىلەرنىڭ تېخىمۇ يۇقىرى چاستوتا 80 ~ 90 ° قا بۆلۈنگەنلىكىنى بايقىدۇق (رەسىم 6f - j).
ھۈجەيرىلەرنىڭ بۆلۈنۈشىنىڭ يۆنىلىشى SAM نىڭ گېئومېتىرىيەسىگە باغلىق ، بولۇپمۇ توقۇلمىلارنىڭ ئەگرى سىزىقى كەلتۈرۈپ چىقارغان جىددىيلىك بېسىمىغا باغلىق ئىكەنلىكى ئوتتۇرىغا قويۇلغان. شۇڭلاشقا بىز دېللانىڭ يەرشارى ئۆزگىرىشى ۋە pCUC2 :: gai-1-VENUS ئۆسۈملۈكلىرىدە SAM نىڭ شەكلى ئۆزگەرتىلگەن-ئۆزگەرمىگەنلىكىنى سورىدۇق. ئىلگىرى خەۋەر قىلىنغاندەك ، دېللا يەرشارى ئۆزگىرىشچان SAM نىڭ چوڭلۇقى ياۋا تىپتىن چوڭ ئىدى (قوشۇمچە رەسىم 13a ، b ، d). CLV3 ۋە STM RNA نىڭ دەل جايىدا بىرىكتۈرۈلۈشىدە دېللا ئۆزگىرىشىدىكى مېرستىمنىڭ كېڭىيىشىنى دەلىللىدى ۋە غول ھۈجەيرە پەردىسىنىڭ يان تەرەپتىكى كېڭىيىشىنى تېخىمۇ كۆرسەتتى (قوشۇمچە رەسىم 13e ، f ، h ، i). قانداقلا بولمىسۇن ، SAM ئەگرى سىزىقى ھەر ئىككى گېن تىپىدا ئوخشىشىپ كېتەتتى (قوشۇمچە رەسىم 13k ، m ، n ، p). بىز ياۋايى تىپقا سېلىشتۇرغاندا ئەگرى سىزىق ئۆزگەرمەي gai-t6 rga-t2 rgl1-1 rgl2-1 della تۆت چاسا ئۆزگىرىشچانلىقىدا مۇشۇنىڭغا ئوخشاش چوڭايغانلىقىنى كۆردۇق (قوشۇمچە رەسىم 13c ، d ، g ، j ، l ، o ، p). ھۈجەيرە بۆلۈش يۆنىلىشىنىڭ چاستوتىسى دېللا تۆت بۇرجەكلىك ئۆزگىرىشنىڭ تەسىرىگە ئۇچرىغان ، ئەمما دېللا مونولىت ئۆزگىرىشچانلىقىغا قارىغاندا ئازراق دەرىجىدە (قوشۇمچە رەسىم 12d - f). بۇ خىل دورا ئېففېكتى ئەگرى سىزىققا تەسىر كۆرسىتەلمەسلىك بىلەن بىللە ، دېللا تۆت چاسا ئۆزگىرىشچان قالدۇق RGL3 پائالىيىتىنىڭ DELLA پائالىيىتىنىڭ يوقىلىشىدىن كېلىپ چىققان ھۈجەيرە بۆلۈش يۆنىلىشىنىڭ ئۆزگىرىشىنى چەكلەيدىغانلىقىنى ۋە يان ھۈجەيرە بۆلۈنمىسىنىڭ ئۆزگىرىشى SAM گېئومېتىرىيەسىنىڭ ئۆزگىرىشىگە ئەمەس ، بەلكى GA سىگنال پائالىيىتىنىڭ ئۆزگىرىشىگە ماس كېلىدىغانلىقىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ. يۇقىرىدا دەپ ئۆتكىنىمىزدەك ، CUC2 تەشۋىق قىلغۇچى S4 دىكى IPR ئىپادىسىنى P4 دىن باشلايدۇ (قوشۇمچە رەسىم 14a ، b) ، ئەكسىچە ، pCUC2 :: gai-1-VENUS SAM نىڭ ھەجىمى كىچىكلىگەن ، ئەمما ئەگرى سىزىقى يۇقىرى (قوشۇمچە 14c - h). PCUC2 :: gai-1-VENUS SAM مورفولوگىيىسىنىڭ ئۆزگىرىشى ياۋا تىپقا سېلىشتۇرغاندا مېخانىك بېسىمنىڭ ئوخشىمىغان تارقىلىشىنى كەلتۈرۈپ چىقىرىشى مۇمكىن ، بۇنىڭدا يۇقىرى ئايلانما بېسىم SAM مەركىزىدىن قىسقا ئارىلىقتا باشلىنىدۇ 47. ئۇنىڭدىن باشقا ، pCUC2 :: gai-1-VENUS SAM مورفولوگىيىسىدىكى ئۆزگىرىش گېنگېن ئىپادىلەش كەلتۈرۈپ چىقارغان رايون مېخانىكىلىق خۇسۇسىيىتىنىڭ ئۆزگىرىشىدىن كېلىپ چىقىشى مۇمكىن. ھەر ئىككى خىل ئەھۋال ئاستىدا ، بۇ GA سىگنالىدىكى ئۆزگىرىشلەرنىڭ تەسىرىنى قىسمەن تولۇقلاپ ، ھۈجەيرىلەرنىڭ ئايلانما / تەتۈر يۆنىلىشتە بۆلۈنۈش ئېھتىماللىقىنى ئاشۇرۇپ ، كۆزىتىشىمىزنى چۈشەندۈرىدۇ.
يىغىپ ئېيتقاندا ، سانلىق مەلۇماتلىرىمىز تېخىمۇ يۇقىرى GA سىگنالىنىڭ IPR دىكى ھۈجەيرە بۆلۈش ئايروپىلانىنىڭ يان يۆنىلىشىدە ئاكتىپ رول ئوينايدىغانلىقىنى ئىسپاتلايدۇ. ئۇلار يەنە meristem ئەگرى سىزىقىنىڭ IPR دىكى ھۈجەيرە بۆلۈش ئايروپىلانىنىڭ يۆنىلىشىگە تەسىر كۆرسىتىدىغانلىقىنى كۆرسەتتى.
IPR دىكى بۆلۈش ئايروپىلانىنىڭ تەتۈر يۆنىلىشلىك يۆنىلىشى ، GA سىگنالىنىڭ يۇقىرى بولۇشى سەۋەبىدىن ، GA نىڭ SAM ئىچىدىكى تارقىلىشچان رايوندا رادىئاتسىيە ھۈجەيرىسى ھۆججىتىنى ئالدىن تەشكىللەپ ، كېيىن يۇقۇملىنىش ئىچكى قىسمىدا ئۇچرايدىغان ھۈجەيرە تەشكىلاتىغا ئېنىقلىما بېرىدىغانلىقىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ. دەرۋەقە ، بۇ خىل ھۈجەيرە ھۆججەتلىرى دېللا يەرشارى ئۆزگىرىشىنىڭ SAM رەسىملىرىدە دائىم كۆرۈندى (6b رەسىم). شۇڭا ، SAM دىكى GA سىگنالىنىڭ بوشلۇق ئەندىزىسىنىڭ تەرەققىيات فۇنكسىيەسىنى يەنىمۇ ئىلگىرىلىگەن ھالدا تەتقىق قىلىش ئۈچۈن ، بىز ۋاقىت تەسۋىرى ئارقىلىق IPR دىكى ھۈجەيرىلەرنىڭ ياۋا تىپتىكى (Ler ۋە Col-0) ، دېللا يەرشارى ئۆزگىرىشى ۋە pCUC2 :: gai-1-VENUS گېنى يۆتكەلگەن ئۆسۈملۈكلەرنىڭ بوشلۇقتىكى تەشكىللىنىشىنى تەھلىل قىلدۇق.
بىز qmRGA نىڭ IPR دىكى GA سىگنال بېرىش پائالىيىتىنىڭ P1 / P2 دىن ئېشىپ ، P4 نىڭ يۇقىرى پەللىگە چىققانلىقىنى ، بۇ ئەندىزىنىڭ ۋاقىتنىڭ ئۆتۈشىگە ئەگىشىپ ئىزچىل ساقلانغانلىقىنى بايقىدۇق (4a - f ۋە قوشۇمچە رەسىم 8c - f ، k). GA سىگنالىنىڭ كۆپىيىشى بىلەن IPR دىكى ھۈجەيرىلەرنىڭ بوشلۇقتىكى تەشكىللىنىشىنى تەھلىل قىلىش ئۈچۈن ، بىز ئۇلارنىڭ تەرەققىيات تەقدىرىگە ئاساسەن Ler IPR ھۈجەيرىسىگە ۋە P4 نىڭ يان تەرىپىگە بەلگە قويدۇق ، تۇنجى كۆزىتىشتىن كېيىن 34 سائەت ئانالىز قىلىندى ، يەنى ئىككى قېتىمدىن ئارتۇق پىلاستىك ۋاقىت ، بىزنىڭ دەسلەپكى قەدەمدىكى تەرەققىيات جەريانىدا P1 / P2 دىن P4 غىچە IPR ​​ھۈجەيرىسىگە ئەگىشىمىز. بىز ئوخشىمىغان ئۈچ خىل رەڭنى قوللاندۇق: P4 ئەتراپىدىكى ئىپتىدائىي ئۆيگە بىرىكتۈرۈلگەن ھۈجەيرىلەرگە سېرىق ، IPR دىكىگە يېشىل ، ھەر ئىككى جەريانغا قاتناشقانلار ئۈچۈن بىنەپشە (7a - c رەسىم). T0 (0 h) دە ، P4 نىڭ ئالدىدا 1-2 قەۋەت IPR ھۈجەيرىسى كۆرۈندى (7a رەسىم). ئويلىغىنىدەك ، بۇ ھۈجەيرىلەر بۆلۈنگەندە ، ئۇلار ئاساسلىقى تەتۈر بۆلۈش ئايروپىلانى ئارقىلىق قىلغان (رەسىم 7a - c). مۇشۇنىڭغا ئوخشاش نەتىجىلەر Col-0 SAM ئارقىلىق قولغا كەلتۈرۈلگەن (P3 نى ئاساس قىلغان ، ئۇنىڭ چېگراسى Ler دىكى P4 بىلەن ئوخشاش) شۇڭا ، IPR ھۈجەيرىلىرىنىڭ بۆلۈش ئەندىزىسى ئىچكى ھۈجەيرىلەرگە ئوخشاش ھۈجەيرىلەرنى رادىئاتسىيە قۇرغا ئالدىن تەشكىللەيدۇ. رادىئاتسىيە قۇرلىرىنىڭ تەشكىللىنىشى ۋە ئارقا-ئارقىدىن ئەزالار ئارىسىدىكى IPR ھۈجەيرىسىنىڭ يەرلىكلىشىشى بۇ ھۈجەيرىلەرنىڭ ئۆز ئارا تۇغما ئىكەنلىكىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ.
بۇ يەردە بىز بىر خىل ئۆلچەملىك GA سىگنال بىئولوگىيىلىك سېنزور ، qmRGA نى تەتقىق قىلىپ چىقتۇق ، ئۇ GA سىگنالى پائالىيىتىنىڭ GA ۋە GA قوبۇللىغۇچ قويۇقلۇقىنىڭ بىرىكىشىدىن كېلىپ چىققان GA سىگنال پائالىيىتىنى مىقدارلاشتۇرۇپ سىزىشقا يول قويىدۇ ، شۇنىڭ بىلەن بىر ۋاقىتتا ئىچكى سىگنال يولىغا ئارىلىشىشنى ئازايتىدۇ ، بۇ ئارقىلىق ھۈجەيرە سەۋىيىسىدىكى GA ئىقتىدارىغا ئائىت ئۇچۇرلار بىلەن تەمىنلەيدۇ. بۇنىڭ ئۈچۈن بىز ئۆزگەرتىلگەن DELLA ئاقسىلى mRGA نى قۇردۇق ، ئۇ DELLA ئۆز-ئارا ھەمكارلىق شېرىكلىرىنى باغلاش ئىقتىدارىنى يوقىتىپ قويدى ، ئەمما GA كەلتۈرۈپ چىقىرىدىغان ئاقسىلغا سەزگۈر ھالەتتە قالدى. qmRGA GA سەۋىيىسىدىكى تاشقى ۋە ئىچكى مەنبەلىك ئۆزگىرىشلەرگە ئىنكاس قايتۇرىدۇ ، ئۇنىڭ ھەرىكەتچان سېزىش خۇسۇسىيىتى تەرەققىيات جەريانىدا GA سىگنال پائالىيىتىدىكى بوشلۇقتىكى ئۆزگىرىشلەرنى باھالايدۇ. qmRGA مۇ ناھايىتى جانلىق قورال ، چۈنكى ئۇ ئىپادىلەشتە ئىشلىتىلىدىغان تەشۋىقاتنى ئۆزگەرتىش ئارقىلىق ئوخشىمىغان توقۇلمىلارغا ماسلىشالايدۇ (زۆرۈر تېپىلغاندا) ، GA سىگنال يولىنىڭ ساقلانغان خاراكتېرى ۋە ئانگىئوسپېرما ھالقىسىدىكى PFYRE موتىفنى كۆزدە تۇتقاندا ، ئۇ باشقا جانلىقلارغا يۆتكىلىشى مۇمكىن. بۇنىڭغا ماس ھالدا ، گۈرۈچ SLR1 DELLA ئاقسىلى (HYY497AAA) دىكى ئوخشاش ئۆزگىرىشمۇ SLR1 نىڭ ئۆسۈشىنى بېسىش ھەرىكىتىنى باستۇرىدىغانلىقى كۆرسىتىلدى ، شۇنىڭ بىلەن بىر ۋاقىتتا ئۇنىڭ GA ئارقىلىق مۇرەسسە قىلىنىشىنى ئازراق ئازايتتى ، mRGA23 غا ئوخشاش. تىلغا ئېلىشقا ئەرزىيدىغىنى ، Arabidopsis دىكى يېقىنقى تەتقىقاتلاردا كۆرسىتىلىشىچە ، PFYRE ساھەسىدە (S474L) يەككە ئامىنو كىسلاتانىڭ ئۆزگىرىشى RGA نىڭ ترانسكرىپسىيە پائالىيىتىنى ئۆزگەرتىپ ، ئۇنىڭ ترانسكرىپسىيە ئامىلى شېرىكلىرى بىلەن ئۆز-ئارا تەسىر كۆرسىتىش ئىقتىدارىغا تەسىر يەتكۈزمىگەن. گەرچە بۇ ئۆزگىرىش mRGA دا بار بولغان 3 خىل ئامىنو كىسلاتانىڭ ئورنىغا ئىنتايىن يېقىن بولسىمۇ ، ئەمما تەتقىقاتىمىز شۇنى ئىسپاتلىدىكى ، بۇ ئىككى خىل ئۆزگىرىش DELLA نىڭ روشەن ئالاھىدىلىكىنى ئۆزگەرتىدۇ. گەرچە كۆپىنچە ترانسكرىپسىيە ئامىلى شېرىكلىرى DELLA26,51 نىڭ LHR1 ۋە SAW ساھەسىگە باغلانغان بولسىمۇ ، PFYRE ساھەسىدىكى بىر قىسىم ساقلانغان ئامىنو كىسلاتالار بۇ ئۆز-ئارا تەسىرنى مۇقىملاشتۇرۇشقا ياردەم بېرىشى مۇمكىن.
Internode ئېچىش ئۆسۈملۈك قۇرۇلمىسى ۋە ھوسۇلنى ئاشۇرۇشتىكى ئاچقۇچلۇق ئالاھىدىلىك. qmRGA IPR internode progenitor ھۈجەيرىسىدە تېخىمۇ يۇقىرى GA سىگنال بېرىش پائالىيىتىنى ئاشكارىلىدى. مىقدار تەسۋىر ھاسىل قىلىش ۋە گېننى بىرلەشتۈرۈش ئارقىلىق ، GA سىگنال ئەندىزىسىنىڭ SAM ئېپىدېرمىسىدىكى ئايلانما / تەتۈر ھۈجەيرە بۆلۈش ئايروپىلانىنىڭ ئۈستۈنكى قەۋەتنى كۆرسىتىپ ، ئىنتېرنېت تورىنى تەرەققىي قىلدۇرۇشقا ئېھتىياجلىق ھۈجەيرە بۆلۈش تەشكىلاتىنى شەكىللەندۈرگەنلىكىنى كۆرسەتتۇق. تەرەققىيات جەريانىدا ھۈجەيرە بۆلۈش ئايروپىلانى يۆنىلىشىنىڭ بىر قانچە تەڭشىگۈچىسى ئېنىقلاندى. خىزمىتىمىز GA سىگنال پائالىيىتىنىڭ بۇ ھۈجەيرە پارامېتىرىنى قانداق تەڭشەيدىغانلىقىنى ئېنىق مىسال بىلەن تەمىنلەيدۇ. DELLA ئالدىن قاچىلانغان ئاقسىللار توپى بىلەن ئۆز-ئارا تەسىر كۆرسىتەلەيدۇ41 ، شۇڭا GA سىگنالى پوستلاق قەۋىتىدىكى مىكرو قۇتۇب يۆنىلىشىگە بىۋاسىتە تەسىر كۆرسىتىش ئارقىلىق ھۈجەيرە بۆلۈش ئايروپىلانى يۆنىلىشىنى تەڭشىشى مۇمكىن. بىز ئويلىمىغان يەردىن SAM دە ، تېخىمۇ يۇقىرى GA سىگنال پائالىيىتىنىڭ باغلىنىشى ھۈجەيرىلەرنىڭ ئۇزىرىشى ياكى بۆلۈنۈشى بولماستىن ، بەلكى پەقەت ئۆسۈش ئانتىروپوپىيىسى ئىكەنلىكىنى كۆرسىتىپ بەردى ، بۇ GA نىڭ IPR دىكى ھۈجەيرە بۆلۈش يۆنىلىشىگە بىۋاسىتە تەسىر كۆرسىتىدۇ. قانداقلا بولمىسۇن ، بىز بۇ ئۈنۈمنىڭ ۋاسىتىلىك بولۇشى مۇمكىنلىكىنىمۇ نەزەردىن ساقىت قىلالمايمىز ، مەسىلەن GA كەلتۈرۈپ چىقارغان ھۈجەيرە تېمىنىڭ يۇمشىشى ئارقىلىق مۇرەسسە قىلىنغان 56. ھۈجەيرە تام خۇسۇسىيىتىنىڭ ئۆزگىرىشى مېخانىكىلىق بېسىمنى كەلتۈرۈپ چىقىرىدۇ 57،58 ، ئۇ يەنە پوستلاق مىكرو مىكرو قۇتۇبىنىڭ يۆنىلىشىگە تەسىر كۆرسىتىپ ، ھۈجەيرە بۆلۈش ئايروپىلانىنىڭ يۆنىلىشىگە تەسىر كۆرسىتەلەيدۇ. GA كەلتۈرۈپ چىقارغان مېخانىك بېسىم ۋە GA نىڭ مىكرو قۇتۇب يۆنىلىشىنى بىۋاسىتە تەڭشەشنىڭ بىرلەشمە تەسىرى IPR دا ھۈجەيرە بۆلۈش يۆنىلىشىنىڭ مۇئەييەن ئەندىزىسىنى ھاسىل قىلىشقا قاتنىشىشى مۇمكىن ، بۇ پىكىرنى سىناش ئۈچۈن يەنىمۇ ئىلگىرىلىگەن ھالدا تەتقىقات ئېلىپ بېرىشقا توغرا كېلىدۇ. ئوخشاشلا ، ئىلگىرىكى تەتقىقاتلار DELLA ئۆز-ئارا تەسىر كۆرسىتىدىغان ئاقسىل TCP14 ۋە 15 نىڭ ئىنتېرنېتنىڭ شەكىللىنىشىنى كونترول قىلىشتىكى مۇھىملىقىنى گەۋدىلەندۈردى ، بۇ ئامىللار GA نىڭ ھەرىكىتىنى BREVIPEDICELLUS (BP) ۋە PENNYWISE (PNY) بىلەن مۇرەسسە قىلىشى مۇمكىن ، ئۇلار ئىچكى سىگنالنىڭ تەرەققىياتىغا تەسىر كۆرسىتىدۇ. DELLAs نىڭ مىستىنوستېروئىد ، ئېتىلېن ، قاشتېشى كىسلاتاسى ۋە ئابىسسىك كىسلاتا (ABA) سىگنال بېرىش يولى بىلەن ئۆز-ئارا تەسىر كۆرسىتىدىغانلىقىنى كۆزدە تۇتقاندا ، بۇ ھورمونلارنىڭ مىكرو قۇتۇب يۆنىلىشىگە تەسىر كۆرسىتەلەيدىغانلىقى 65 ، GA نىڭ ھۈجەيرە بۆلۈش يۆنىلىشىگە كۆرسىتىدىغان تەسىرى باشقا ھورمونلار ئارقىلىق مۇرەسسە قىلىنىشى مۇمكىن.
دەسلەپكى سىتولوگىيەلىك تەتقىقاتتا كۆرسىتىلىشىچە ، Arabidopsis SAM نىڭ ئىچكى ۋە تاشقى رايونلىرى ئىنتېرنېت تورىنى تەرەققىي قىلدۇرۇش ئۈچۈن تەلەپ قىلىنغان. GA نىڭ ئىچكى توقۇلمىلاردىكى ھۈجەيرە بۆلۈنۈشىنى ئاكتىپ تەڭشەيدىغانلىقى 12 GA نىڭ SAM دىكى meristem ۋە internode نىڭ چوڭ-كىچىكلىكىنى تەڭشەشتىكى قوش ئىقتىدارىنى قوللايدۇ. يۆنىلىشلىك ھۈجەيرە بۆلۈش ئەندىزىسىمۇ ئىچكى SAM توقۇلمىلىرىدا قاتتىق تەڭشەلگەن بولۇپ ، بۇ بەلگىلىمە غولنىڭ ئۆسۈشىدە ئىنتايىن مۇھىم. GA نىڭ ئىچكى SAM تەشكىلاتىدىكى ھۈجەيرە بۆلۈش ئايروپىلانىغا يۆنىلىش كۆرسىتىشتە رول ئوينايدىغان ياكى ئوينالمايدىغانلىقى ، بۇ ئارقىلىق SAM ئىچىدىكى ئىچكى ئەزالارنىڭ ئۆلچىمى ۋە تەرەققىياتىنى ماس قەدەمدە ماسلاشتۇرىدىغان ياكى قىلالمايدىغانلىقىنى تەكشۈرۈش قىزىقارلىق بولىدۇ.
ئۆسۈملۈكلەر تۇپراقتا ياكى 1x Murashige-Skoog (MS) ئوتتۇرسىدىكى (Duchefa) ئۆلچەملىك شارائىتتا% 1 لىك ساخاروزا ۋە% 1 ئاگار (سىگما) تولۇقلاپ ئۆستۈرۈلدى ، پەقەت گىئوكوتېل ۋە يىلتىز ئۆسۈش تەجرىبىسى بۇنىڭ سىرتىدا. نىترات تەجرىبىسى ئۈچۈن ، ئۆسۈملۈكلەر ئۇزۇن مۇددەتلىك شارائىتتا يېتەرلىك نىترات (0 ياكى 10 mM KNO3) ، 0.5 mM NH4 سۇيۇقلاندۇرۇلغان ،% 1 لىك ساخاروزا ۋە% 1 A ئاگار (سىگما) تولۇقلانغان MS ئوتتۇراھال (bioWORLD ئۆسۈملۈك ۋاستىسى) دە ئۆستۈرۈلدى.
PDONR221 غا قىستۇرۇلغان GID1a cDNA pDONR P4-P1R-pUBQ10 ۋە pDONR P2R-P3-mCherry بىلەن pB7m34GW غا بىرلەشتۈرۈلۈپ pUBQ10 :: GID1a-mCherry ھاسىل قىلىندى. PDONR221 غا قىستۇرۇلغان IDD2 DNA pB7RWG266 غا بىرلەشتۈرۈلۈپ p35S ھاسىل قىلىندى: IDD2-RFP. PGID1b :: 2xmTQ2-GID1b ھاسىل قىلىش ئۈچۈن ، GID1b كودلاش رايونىنىڭ يۇقىرى ئېقىمىدىكى 3.9 كىلوگراملىق بۆلەك ۋە GID1b cDNA (1.3 kb) ۋە تېرمىنال (3.4 kb) بولغان 4.7 كىلوگراملىق بۆلەك ئالدى بىلەن قوشۇمچە 3-جەدۋەلدىكى پىرىمېرلار ئارقىلىق كۈچەيتىلدى ، ئاندىن pDONR P4 P2R-P3 (Thermo Fisher Scientific) ئايرىم-ئايرىم ھالدا ئەڭ ئاخىرىدا pDONR221 2xmTQ268 بىلەن Gateway كلونلاش ئارقىلىق pGreen 012567 نىشان ۋېكتورىغا قوشۇلدى. PCUC2 :: LSSmOrange ھاسىل قىلىش ئۈچۈن ، CUC2 تەشۋىق قىلغۇچى تەرتىپى (ATG نىڭ يۇقىرى ئېقىمى 3229 bp) ، ئۇنىڭدىن كېيىن N7 يادرو يەرلىكلەشتۈرۈش سىگنالى ۋە NOS ترانسكرىپسىيە تېرمىنالى (GGwayway 3) بۆلەكلىرىنى ئىشلىتىپ pGreen kanamycin نىشانلانغان ۋېكتورغا توپلاندى. ئۆسۈملۈك ئىككىلىك ۋېكتورى Agrobacterium tumefaciens سۈزگۈچ GV3101 غا كىرگۈزۈلۈپ ، ئايرىم-ئايرىم ھالدا Agrobacterium سىڭىپ كىرىش ئۇسۇلى ئارقىلىق نىكوتيانا بېنتامىنا يوپۇرمىقىغا ۋە گۈل چىلاش ئۇسۇلى ئارقىلىق Arabidopsis thaliana Col-0 غا كىرگۈزۈلدى. pUBQ10 :: qmRGA pUBQ10 :: GID1a-mCherry ۋە pCLV3 :: mCherry-NLS qmRGA ئايرىم-ئايرىم ھالدا مۇناسىۋەتلىك كرېستلەرنىڭ F3 ۋە F1 ئەۋلادلىرىدىن ئايرىۋېتىلدى.
RNA نىڭ دەل جايىدا بىرىكتۈرۈلۈشى تەخمىنەن 1 سانتىمېتىر ئۇزۇنلۇقتىكى ئېتىش ئۇچىدا ئېلىپ بېرىلغان بولۇپ ، بۇلار FAA ئېرىتمىسىدە (% 3.7 فورمالدېگىد ،% 5 لىك كىسلاتا كىسلاتاسى ،% 50 ئېتانول) ئالدىن سوۋۇتۇپ ° C4 قا چىققان. 2 × 15 مىنۇتلۇق ۋاكۇئۇملۇق داۋالاشتىن كېيىن ، ئوڭشاش ئۇسۇلى ئۆزگەرتىلدى ۋە ئەۋرىشكە بىر كېچىدىلا سىڭدۈرۈلدى. GID1a, GID1b, GID1c, GAI, RGL1, RGL2, ۋە RGL3 cDNAs ۋە ئۇلارنىڭ 3′-UTR لىرىغا قارشى ئانتىتېلا تەكشۈرۈش ئەسۋابى Rosier et al.73 تەسۋىرلىگەن قوشۇمچە 3-جەدۋەلدە كۆرسىتىلگەن پىرىسلار ئارقىلىق بىرىكتۈرۈلدى. Digoxigenin ماركىلىق تەكشۈرۈش ئەسۋابى دىگوكسىگېننىڭ ئانتىتېلاسى (3000 ھەسسە سۇيۇلدۇرۇش ؛ روچې ، مۇندەرىجە نومۇرى: 11 093 274 910) ئارقىلىق ئىممۇنىتېتسىزلاندۇرۇلدى ، بۆلەكلەرگە 5 برومو -4 خلورو -3 ئىندول فوسفات (BCIP ، 250 ھەسسە ئېرىتىش) / نىتروبلۇس ئېرىتمىسى (NBT) ئېرىتمىسى 200